酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液
酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液
培养基系列
酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液
包括酵母普通感受态制作和文库转化用感受态制作用到的所有试剂，及酵母转化过程中使用的所有试剂；一些酵母互作试验中用到的显色物质（x-Gal、x-a-Gal、IPTG等），竞争性抑制剂（3-AT），报告基因AbA的添加物Aureobasidin A(AbA)金担子素A。还包括提高酵母转化效率的YPD Plus Liquid Medium,酵母mating接合试验使用的培养基2X YPDA，0.5X YPDA；和过滤除菌的葡萄糖、半乳糖、棉子糖溶液等。
| 酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液 | 应用 |
|---|---|
| 1 M LiAc (10X) | 1M LiAc (10X) 是一种制作酿酒酵母感受态的buffer，可以配制1.1X TE/LiAc |
| 10X TE Buffer | 由Tris和EDTA配制而成的TE缓冲液，呈弱碱性，对DNA的碱基有保护作用，同时是一种制作酿酒酵母感受态的Buffer |
| 50% PEG 3350 | PEG3350在酵母转化中起到在高浓度LiAc环境中保护细胞膜，减少LiAc对细胞膜结构损伤的作用，提高转化效率 |
| 1.1X TE/LiAc Solution | 是一种制作酿酒酵母感受态的buffer。TE起缓冲液的作用，提供稳定的PH值环境；LiAc可使酵母细胞处于一种短暂的感受状态 |
| PEG/LiAc Solution | PEG/LiAc是的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂，可以提高转化效率 |
| Carrier DNA (鲑鱼精DNA)（10mg/mL） | Carrier DNA (鲑鱼精DNA) 为短的线形单链DNA，可包裹质粒DNA，促进质粒进入酵母细胞，另外还可保护质粒免于被DNA酶降解 |
| 2X YPDA Liquid Medium | 比普通YPDA提供加倍的营养，主要用于酵母单杂、双杂、三杂试验中的mating试验，可以提高接合效率 |
| 1X YPDA Liquid Medium | 即用型1X YPDA，已经121℃-20min高压灭菌（葡萄糖组分过滤除菌），可直接使用，主要用于酵母菌的液体摇菌培养或感受态制作。 |
| 0.5X YPDA Liquid Medium | 比普通YPDA提供减半的营养，主要用于酵母单杂、双杂、三杂试验中的mating试验，在接合试验结束后重悬涂板可以获得更高的接合效率 |
| 0.2% adenine 溶液 | 为酵母生长提供腺嘌呤，在培养基中补加adenine可以使菌落变白色也可提高酵母细胞的生长速度 |
| Adenine sulfate | 为酵母生长提供腺嘌呤，在培养基中补加adenine可以使菌落变白色也可提高酵母细胞的生长速度 |
| YPD Plus Liquid Medium | 是一种营养丰富的酵母转化用培养基，含有多肽、氨基酸、水溶性维生素、甘油等，主要用于酵母单杂、双杂、三杂试验中的质粒转化试验热激后的复苏步骤，可提高转化效率50-100%。 |
| 0.9% (w/v) NaCl Solution | 在酵母转化试验中其可以为酵母细胞维持渗透压，避免细胞破裂 |
| DMSO（过滤除菌） | 一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成 |
| IPTG 溶液（100 mg/ml，过滤除菌） | 常用于大肠杆菌的蓝白斑筛选试验，或用于大肠杆菌的蛋白诱导表达 |
| IPTG 溶液（1M，过滤除菌） | 常用于大肠杆菌的蓝白斑筛选试验，或用于大肠杆菌的蛋白诱导表达 |
| X-Gal 溶液（20 mg/ml，过滤除菌） | X-gal即X-β-gal是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色，常用于大肠杆菌的蓝白斑筛选，酵母单、双杂的X–Gal显色等试验。 |
| X-Gal | X-gal即X-β-gal是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色，常用于大肠杆菌的蓝白斑筛选，酵母单、双杂的X–Gal显色等试验。 |
| X-α-Gal 溶液 (20 mg/ml，过滤除菌) | X-a-Gal是酵母α-半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物，将X-α-Gal直接加在培养基中，通过观察酵母菌落的颜色可以判断GAL4酵母互作系统的MEL1报告基因是否被激活。 |
| 3-AT (3-amino-1,2,4-triazole) | 3-AT 是酵母HIS3蛋白(His3p)的竞争性抑制剂，在培养基中加入3-AT，可以降低背景或减少酵母互作实验的假阳性 |
| 2M 3-AT 溶液（过滤除菌） | 3-AT 是酵母HIS3蛋白(His3p)的竞争性抑制剂，在培养基中加入3-AT，可以降低背景或减少酵母互作实验的假阳性 |
| Aureobasidin A（AbA/金担子素 1 mg/mL） | 金担子素，是一种很强的抗真菌抗生素。AbA抑制酵母中AUR1基因，AUR1基因的突变形式AUR1-C的表达使酵母对AbA产生抗性。利用AUR1-C基因作为蛋白质互作的报告基因可降低仅用营养报告基因（如HIS3）进行低严紧度初筛时产生的假阳性背景 |
| 酿酒酵母感受态制作/转化试剂盒 | 提供了制作和转化酵母感受态的四种试剂：1.1XTE/LiAc、PEG/LiAc、Carrier DNA、DMSO，可以制作200支以上酵母感受态或12支以上文库转化感受态 |
| 酵母基因组菌落PCR试剂盒（Y1HGold鉴定） | 用于酵母基因组DNA的菌落PCR试验，包括Y1HGold酵母单杂系统的pABAi质粒重组入Y1HGold基因组后的PCR鉴定，也可用于其他各种酵母的鉴定。 |
| 酵母菌落PCR试剂盒 | 用于酵母质粒转化或互作筛库试验后的平板菌落PCR鉴定实验，提供酵母细胞裂解液、PCR Mix、和部分酵母鉴定用引物，酵母细胞的裂解仅需十分钟即可完成，操作简单、快速，扩增效率高。 |
| 50%葡萄糖溶液（过滤除菌） | 葡萄糖是最常用的酵母碳源，利用效率高，但会抑制由半乳糖诱导的蛋白表达，经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基使用。 |
| 20%半乳糖溶液（过滤除菌） | 半乳糖可以作为诱导剂加入酵母培养基诱导蛋白表达，唯地生物的糖溶液均经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基使用。 |
| 20%棉子糖溶液（过滤除菌） | 棉子糖既是利用效率很高的酵母碳源又不抑制半乳糖诱导的蛋白表达，唯地生物的糖溶液均经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基使用。 |
| 20%阿拉伯糖溶液（过滤除菌） | 阿拉伯糖可以作为微生物碳源使用，可作为araBAD启动子的诱导剂使用。唯地生物的L -(+)-阿拉伯糖溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基中使用。 |
| 20%果糖溶液（过滤除菌） | 果糖可以作为微生物碳源使用，唯地生物的果糖溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基中使用。 |
| 20%蔗糖溶液（过滤除菌） | 蔗糖可以作为微生物碳源使用，唯地生物的蔗糖溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基中使用。 |
| 20%麦芽糖溶液（过滤除菌） | 麦芽糖可以作为微生物碳源使用，唯地生物的麦芽糖溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基中使用。 |
| 20%鼠李糖溶液（过滤除菌） | 鼠李糖可以作为微生物碳源使用，L -(+)-鼠李糖可作为鼠李糖诱导启动子的诱导剂使用(例如：Lemo21(DE3)原核表达菌株等)。唯地生物的L -(+)-鼠李糖溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基中使用。 |
| 20%乳糖溶液（过滤除菌） | 乳糖可以作为微生物碳源使用，唯地生物的乳糖溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基中使用。 |
