酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液
产品说明
酵母基因组菌落PCR试剂盒可用于酵母基因组DNA的菌落PCR试验，包括Y1HGold酵母单杂系统的pABAi质粒重组入Y1HGold基因组后的PCR鉴定。酵母基因组菌落PCR试剂盒提供酵母细胞裂解液、PCR Mix、和pABAi鉴定用引物，酵母细胞的裂解仅需十分钟即可完成，操作简单、快速，扩增效率高。本试剂盒适用于Y1HGold、AH109、Y187、Y2HGold、EGY48、NMY51、INVSC1、R5421、Mav203等几乎所有酿酒酵母的基因组菌落PCR试验。
产品规格及内容
包装名称
货号
包装含量
目录价
保存条件/时间
酵母基因组菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1030S
50T
280
-20℃ / 24个月
酵母基因组菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1030M
100T
480
-20℃ / 24个月
产品组分
产品组分
YCK1030S
YCK1030M
酵母裂解液Ⅰ
500ul
1ml
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye)
500ul
1ml
URA-99F Primer(Y1HGold-pABAi鉴定用)
40ul（10 μM）
80ul（10 μM）
URA-178F Primer(Y1HGold-pABAi鉴定用)
40ul（10 μM）
80ul（10 μM）
AUR-47R Primer(Y1HGold-pABAi鉴定用)
40ul（10 μM）
80ul（10 μM）
使用方法
一，酵母细胞的裂解
取10ul酵母裂解液Ⅰ加入PCR薄壁管中，无菌牙签或枪头挑一点菌落加入裂解液中（挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜），吹打混匀，盖好薄壁管，放PCR仪中 95度处理10min即可。
二，PCR反应体系的配制
|
组分 |
体积 |
|
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye) |
10ul |
|
步骤一处理好的：酵母细胞裂解液 |
2ul |
|
F/R Primer（10 μM） |
0.8ul / 0.8ul |
|
ddH2O |
补加到20ul |
三，参考PCR扩增程序与参数
|
步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
94 ℃ |
4 min |
1 |
|
变性 |
94 ℃ |
30 S |
35 |
|
退火 |
55 ℃ |
30 S |
35 |
|
延伸 |
72 ℃ |
X (延伸速度：1kb/30s) |
35 |
|
延伸 |
72 ℃ |
5 min |
1 |
四，Y1HGold-pABAi鉴定用引物备注
|
引物对 |
Y1HGold-pABAi空载鉴定产物长度 |
Y1HGold-pABAi-gene鉴定产物长度 |
|
URA-99F/AUR-47R |
1350bp |
1350bp+连入基因长度 |
|
URA-178F/AUR-47R |
1429bp |
1429bp+连入基因长度 |
注意事项
1. 酵母细胞裂解时挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜，加入酵母过多会降低PCR扩增效率。
2. PCR退火温度可在54℃-60℃范围浮动，若扩增不出条带或条带较弱可降低退火温度，若有杂带可提高退火温度。
3. 部分DNA片段含有复杂结构或GC/AT含量较高，PCR扩增较难，可提高PCR扩增体系至50ul。
4. 若对PCR产物有测序要求，客户可自备高保真PCR酶进行扩增或自备相关PCR引物进行扩增。
产品规格及内容
包装名称
货号
包装含量
目录价
保存条件/时间
酵母基因组菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1030S
50T
280
-20℃ / 24个月
酵母基因组菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1030M
100T
480
-20℃ / 24个月
产品组分
产品组分
YCK1030S
YCK1030M
酵母裂解液Ⅰ
500ul
1ml
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye)
500ul
1ml
URA-99F Primer(Y1HGold-pABAi鉴定用)
40ul（10 μM）
80ul（10 μM）
URA-178F Primer(Y1HGold-pABAi鉴定用)
40ul（10 μM）
80ul（10 μM）
AUR-47R Primer(Y1HGold-pABAi鉴定用)
40ul（10 μM）
80ul（10 μM）
使用方法
一，酵母细胞的裂解
取10ul酵母裂解液Ⅰ加入PCR薄壁管中，无菌牙签或枪头挑一点菌落加入裂解液中（挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜），吹打混匀，盖好薄壁管，放PCR仪中 95度处理10min即可。
二，PCR反应体系的配制
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组分 |
体积 |
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Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye) |
10ul |
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步骤一处理好的：酵母细胞裂解液 |
2ul |
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F/R Primer（10 μM） |
0.8ul / 0.8ul |
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ddH2O |
补加到20ul |
三，参考PCR扩增程序与参数
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步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
94 ℃ |
4 min |
1 |
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变性 |
94 ℃ |
30 S |
35 |
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退火 |
55 ℃ |
30 S |
35 |
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延伸 |
72 ℃ |
X (延伸速度：1kb/30s) |
35 |
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延伸 |
72 ℃ |
5 min |
1 |
四，Y1HGold-pABAi鉴定用引物备注
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引物对 |
Y1HGold-pABAi空载鉴定产物长度 |
Y1HGold-pABAi-gene鉴定产物长度 |
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URA-99F/AUR-47R |
1350bp |
1350bp+连入基因长度 |
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URA-178F/AUR-47R |
1429bp |
1429bp+连入基因长度 |
注意事项
1. 酵母细胞裂解时挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜，加入酵母过多会降低PCR扩增效率。
2. PCR退火温度可在54℃-60℃范围浮动，若扩增不出条带或条带较弱可降低退火温度，若有杂带可提高退火温度。
3. 部分DNA片段含有复杂结构或GC/AT含量较高，PCR扩增较难，可提高PCR扩增体系至50ul。
4. 若对PCR产物有测序要求，客户可自备高保真PCR酶进行扩增或自备相关PCR引物进行扩增。
