酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液
产品说明
酵母菌落PCR试剂盒用于酵母质粒转化或互作筛库试验后的平板菌落PCR鉴定实验，提供酵母细胞裂解液、PCR Mix、和部分酵母鉴定用引物，酵母细胞的裂解仅需十分钟即可完成，操作简单、快速，扩增效率高。本试剂盒适用于AH109、Y187、Y2HGold、Y1HGold、EGY48、NMY51、INVSC1、R5421、Mav203等几乎所有酿酒酵母的菌落PCR试验。
产品规格及内容
包装名称
货号
包装含量
目录价
保存条件/时间
酵母菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1020S
50T
200
-20℃ / 24个月
酵母菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1020M
200T
400
-20℃ / 24个月
产品组分与配方
产品组分
YCK1020S
YCK1020M
引物序列
酵母裂解液Ⅰ
500ul
1ml X 2管
------
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye)
500ul
1ml X 2管
------
T7 Primer
40ul（10 μM）
160ul（10 μM）
5' TAATACGACTCACTATAGGGC 3'
5' AD Primer
40ul（10 μM）
160ul（10 μM）
5' GATGAAGATACCCCACCAAACC 3'
3' AD Primer
40ul（10 μM）
160ul（10 μM）
5' GCGGGGTTTTTCAGTATCTACG 3'
使用方法
一，酵母细胞的裂解
取10ul酵母裂解液Ⅰ加入PCR薄壁管中，无菌牙签或枪头挑一点菌落加入裂解液中（挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜），吹打混匀，盖好薄壁管，放PCR仪中 95度处理10min即可。
二，PCR反应体系的配制
|
组分 |
体积 |
|
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye) |
10ul |
|
步骤一处理好的：酵母细胞裂解液 |
2ul |
|
F/R Primer（10 μM） |
0.8ul / 0.8ul |
|
ddH2O |
补加到20ul |
三，参考PCR扩增程序与参数
|
步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
94 ℃ |
4 min |
1 |
|
变性 |
94 ℃ |
30 S |
35 |
|
退火 |
55 ℃ |
30 S |
35 |
|
延伸 |
72 ℃ |
X (延伸速度：1kb/30s) |
35 |
|
最后一步延伸 |
72 ℃ |
5 min |
1 |
四，Y1HGold-pABAi鉴定用引物备注
|
引物对 / 引物 |
用途 |
pGADT7空载 鉴定产物长度 |
pGADT7-gene 鉴定产物长度 |
|
5' AD/3' AD |
扩增pGADT7质粒 |
203bp |
203bp+连入基因长度 |
|
T7 Primer |
可对5' AD/3' AD扩增片段测序 |
|
|
注意事项
1. 酵母细胞裂解时挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜，加入酵母过多会降低PCR扩增效率。
2. PCR退火温度可在54℃-60℃范围浮动，若扩增不出条带或条带较弱可降低退火温度，若有杂带可提高退火温度。
3. 部分DNA片段含有复杂结构或GC/AT含量较高，PCR扩增较难，可提高PCR扩增体系至50ul。
4. 若对PCR产物有测序要求，客户可自备高保真PCR酶进行扩增或自备相关PCR引物进行扩增。
产品规格及内容
包装名称
货号
包装含量
目录价
保存条件/时间
酵母菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1020S
50T
200
-20℃ / 24个月
酵母菌落PCR试剂盒
CAT#：YCK1020M
200T
400
-20℃ / 24个月
产品组分与配方
产品组分
YCK1020S
YCK1020M
引物序列
酵母裂解液Ⅰ
500ul
1ml X 2管
------
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye)
500ul
1ml X 2管
------
T7 Primer
40ul（10 μM）
160ul（10 μM）
5' TAATACGACTCACTATAGGGC 3'
5' AD Primer
40ul（10 μM）
160ul（10 μM）
5' GATGAAGATACCCCACCAAACC 3'
3' AD Primer
40ul（10 μM）
160ul（10 μM）
5' GCGGGGTTTTTCAGTATCTACG 3'
使用方法
一，酵母细胞的裂解
取10ul酵母裂解液Ⅰ加入PCR薄壁管中，无菌牙签或枪头挑一点菌落加入裂解液中（挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜），吹打混匀，盖好薄壁管，放PCR仪中 95度处理10min即可。
二，PCR反应体系的配制
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组分 |
体积 |
|
Taq PCR Mix (2X, with Blue Dye) |
10ul |
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步骤一处理好的：酵母细胞裂解液 |
2ul |
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F/R Primer（10 μM） |
0.8ul / 0.8ul |
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ddH2O |
补加到20ul |
三，参考PCR扩增程序与参数
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步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
94 ℃ |
4 min |
1 |
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变性 |
94 ℃ |
30 S |
35 |
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退火 |
55 ℃ |
30 S |
35 |
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延伸 |
72 ℃ |
X (延伸速度：1kb/30s) |
35 |
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最后一步延伸 |
72 ℃ |
5 min |
1 |
四，Y1HGold-pABAi鉴定用引物备注
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引物对 / 引物 |
用途 |
pGADT7空载 鉴定产物长度 |
pGADT7-gene 鉴定产物长度 |
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5' AD/3' AD |
扩增pGADT7质粒 |
203bp |
203bp+连入基因长度 |
|
T7 Primer |
可对5' AD/3' AD扩增片段测序 |
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注意事项
1. 酵母细胞裂解时挑取菌量不可过多，以重悬后裂解液稍微变色为宜，加入酵母过多会降低PCR扩增效率。
2. PCR退火温度可在54℃-60℃范围浮动，若扩增不出条带或条带较弱可降低退火温度，若有杂带可提高退火温度。
3. 部分DNA片段含有复杂结构或GC/AT含量较高，PCR扩增较难，可提高PCR扩增体系至50ul。
4. 若对PCR产物有测序要求，客户可自备高保真PCR酶进行扩增或自备相关PCR引物进行扩增。
