产品规格

产品组分与配方

使用方法

一，感受态制作方法

1.酵母菌种在YPDA平板上划线，挑新鲜的单菌落到3ml YPDA（用50ml离心管）中30度，250rpm摇菌12h，取50ul,到50ml YPDA （用250ml三角瓶）中，250rpm摇菌到OD600约0.15-0.3，不要超过。

2.室温700g，5min离心收集菌体，弃上清，用100ml YPDA重悬，30度，250rpm摇菌到OD600=0.4-0.5。

3.室温700g，5min离心收集菌体，弃上清，用50ml 无菌ddH2O重悬。

4.室温700g，5min离心收集菌体，弃上清，用15ml 4℃预冷的1.1ΧTE/liAC重悬。1500g，30S离心，弃上清，用0.6ml 1.1ΧTE/liAC重悬，此时可以用来转化酵母文库；也可以分装10支感受态用来转化普通酵母质粒（最好立即使用，也可放冰中保存不超过3小时)

二，感受态转化方法

1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态，步骤如下：Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min，再次放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min以上。          

酵母文库质粒         普通酵母质粒

2.准备不同大小的离心管-----------------------------------------------------------------15ml离心管          1.5ml离心管

依次加入预冷的目的质粒-----------------------------------------------------------------5-15ug              0.1-2ug

Carrier DNA -------------------------------------------------------------------40 µl               5 µl

酵母感受态------------------------------------------------------------------600ul             50-100ul

PEG/LiAc-------------------------------------------------------------------2.5ml               500 µl              

吸打几次混匀，30℃水浴-----------------------------------------------------------------45 min              30 min              

(文库质粒每隔15min翻转6-8次混匀一次；普通质粒每隔10min翻转6-8次混匀一次。）

3.加入无菌的DMSO----------------------------------------------------------------------------160ul               20ul

4.将管放42℃水浴-------------------------------------------------------------------------------20min              15min

(文库质粒每隔10min翻转6-8次混匀一次；普通质粒每隔7.5min翻转6-8次混匀一次。）

5.4000 rpm离心40s弃上清，加入2XYPDA或YPD Plus重悬-------------------3ml                  1ml

6.30℃，200rpm摇菌1.5h。离心 30s弃上清。

7.加入 0.9% (w/v) NaCl重悬，涂板，30℃培养48-120 h。                5-15ml             0.05-1ml

注意事项

1. 制作不同数量的感受态，按比例使用1.1XTE/LiAc Solution，此种方法制作的酵母感受态不可-80度保存。

2. 不开封的1.1XTE/LiAc Solution可在4度保存2年，开封后若发现染菌，停止使用。