酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液
产品说明
Aureobasidin A（金担子素），英文名：Aureobasidin A、AbA，中文名：金担子素; 金担子素A; 短梗霉素A，是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素，是一种很强的抗真菌抗生素。在较低的浓度下(0.1-0.5 μg/mL)可对酵母产生毒性，对其敏感的真菌包括：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用机制：AbA抑制酵母中AUR1基因（1,2）编码的肌醇磷脂酰胺（IPC）合成酶的活性，AUR1基因的突变形式AUR1-C的表达使酵母对AbA产生抗性。利用AUR1-C基因作为蛋白质互作的报告基因可降低仅用营养报告基因（如HIS3）进行低严紧度初筛时产生的假阳性背景。由于AbA可以直接杀死敏感的酵母菌株，而不是只抑制菌株生长，所以基于AbA的筛选可降低酵母互作的假阳性。一般实际操作中，用低浓度的AbA进行初筛时会获得很多克隆，之后再提高筛选严谨度，比如用4个报告基因(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)或提高ABA筛选浓度进行高严谨度的二次筛选以确认阳性克隆。
产品规格
货号
规格
目录价
YC8052S
1 ml
580
YC8052M
5×1 ml
2300
产品内容
包装名称
包装含量
保存条件
保存时间
Aureobasidin A（AbA/金担子素 1 mg/mL）
1 ml/支
-20℃
24个月
产品组分与配方
C60H92N8O11/127785-64-2/1101.13
100%乙醇（Absolute ethanol）溶解
产品组分
分子式/CAS号/分子量
配方ml/L
除菌方式
Aureobasidin A/金担子素/金担子素A
1mg/ml
0.22um过滤
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------
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使用方法
1.Y2HGold（pGBKT7+pGADT7）双杂系统：Y2HGold菌株基因组中整合了AbA抗性基因AUR1-C，Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，当蛋白互作时会激活这四个报告基因的表达。酵母双杂的自激活验证和筛选试验中AbA的常规使用浓度为125-200ng/ml。在做酵母双杂试验之前应对Bait质粒进行自激活验证，初始AbA浓度可以用125ng/ml，若没有自激活，可将此浓度作为后面双杂试验时的筛选浓度，若有自激活可以提高AbA浓度，直到Bait质粒没有自激活为止，但AbA浓度最高不要超过1000ng/ml（若超过此浓度仍然有自激活，说明酵母细胞中有内源转录因子或其他分子可以识别Bait质粒，激活AUR1-C基因，这种试验结果是不准确的）。若酵母筛库试验中获得的阳性菌落太少，可以适当降低筛库时的AbA浓度到100ng/ml。
2.Y1HGold（pAbAi+pGADT7）单杂交系统：Y1HGold菌株基因组本身没有整合AbA抗性基因AUR1-C，在pBait-AbAi 经线性化整合到Y1HGold基因组后变成Y1HGold[Bait/AbAi] 菌株，此菌株含有报告基因：AbAr，当蛋白与DNA互作时会激活AUR1-C（AbAr）基因的表达。酵母单杂的自激活验证和筛选试验中AbA的常规使用浓度为100- 200ng/ml。在做单杂试验之前应对Bait质粒进行自激活验证，初始AbA浓度可以设置为：100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml，若均没有自激活，可选最低浓度作为后面单杂试验时的筛选浓度，若有自激活可以提高AbA浓度，直到Bait质粒没有自激活为止，但AbA浓度最高不要超过1000ng/ml（若超过此浓度仍然有自激活，说明酵母细胞中有内源转录因子或其他分子可以识别报告基因，激活AUR1-C基因，这种试验结果是不准确的）。单杂的自激活验证可先将菌液浓度调整到OD600=0.2， 再稀释100倍到 0.002，取 100ul涂相应AbA浓度平板即可
3. 倒平板：酵母用固体培养基微波炉加热融化后或高压灭菌后冷却至55℃以下，
若配制125ng/ml的AbA平板，每100ml培养基加入12.5ul 1mg/ml的 Aureobasidin A溶液混匀倒平板即可；
若配制200ng/ml的AbA平板，每100ml培养基加入20ul 1mg/ml的 Aureobasidin A溶液混匀倒平板即可。
● 产品参数：
CAS：127785-64-2
英文名称：Aureobasidin A
分子量：1101.13
分子式：C60H92N8O11
纯度：≥98.0%
固体外观：白色粉末
溶解性：易溶于乙醇
注意事项
1.不开封的 Aureobasidin A 溶液（过滤除菌）可在-20℃保存两年，开封后若发现染菌，停止使用。
● 文献
1. Takesako, K. et al. (1993) J. Antibiot. (Tokyo) 46(9):1414–20.
2. Hashida-Okado, T. et al. (1996) Mol. Gen. Genet. 251(2):236–244.
产品规格
货号
规格
目录价
YC8052S
1 ml
580
YC8052M
5×1 ml
2300
产品内容
包装名称
包装含量
保存条件
保存时间
Aureobasidin A（AbA/金担子素 1 mg/mL）
1 ml/支
-20℃
24个月
产品组分与配方
C60H92N8O11/127785-64-2/1101.13
100%乙醇（Absolute ethanol）溶解
产品组分
分子式/CAS号/分子量
配方ml/L
除菌方式
Aureobasidin A/金担子素/金担子素A
1mg/ml
0.22um过滤
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使用方法
1.Y2HGold（pGBKT7+pGADT7）双杂系统：Y2HGold菌株基因组中整合了AbA抗性基因AUR1-C，Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，当蛋白互作时会激活这四个报告基因的表达。酵母双杂的自激活验证和筛选试验中AbA的常规使用浓度为125-200ng/ml。在做酵母双杂试验之前应对Bait质粒进行自激活验证，初始AbA浓度可以用125ng/ml，若没有自激活，可将此浓度作为后面双杂试验时的筛选浓度，若有自激活可以提高AbA浓度，直到Bait质粒没有自激活为止，但AbA浓度最高不要超过1000ng/ml（若超过此浓度仍然有自激活，说明酵母细胞中有内源转录因子或其他分子可以识别Bait质粒，激活AUR1-C基因，这种试验结果是不准确的）。若酵母筛库试验中获得的阳性菌落太少，可以适当降低筛库时的AbA浓度到100ng/ml。
2.Y1HGold（pAbAi+pGADT7）单杂交系统：Y1HGold菌株基因组本身没有整合AbA抗性基因AUR1-C，在pBait-AbAi 经线性化整合到Y1HGold基因组后变成Y1HGold[Bait/AbAi] 菌株，此菌株含有报告基因：AbAr，当蛋白与DNA互作时会激活AUR1-C（AbAr）基因的表达。酵母单杂的自激活验证和筛选试验中AbA的常规使用浓度为100- 200ng/ml。在做单杂试验之前应对Bait质粒进行自激活验证，初始AbA浓度可以设置为：100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml，若均没有自激活，可选最低浓度作为后面单杂试验时的筛选浓度，若有自激活可以提高AbA浓度，直到Bait质粒没有自激活为止，但AbA浓度最高不要超过1000ng/ml（若超过此浓度仍然有自激活，说明酵母细胞中有内源转录因子或其他分子可以识别报告基因，激活AUR1-C基因，这种试验结果是不准确的）。单杂的自激活验证可先将菌液浓度调整到OD600=0.2， 再稀释100倍到 0.002，取 100ul涂相应AbA浓度平板即可
3. 倒平板：酵母用固体培养基微波炉加热融化后或高压灭菌后冷却至55℃以下，
若配制125ng/ml的AbA平板，每100ml培养基加入12.5ul 1mg/ml的 Aureobasidin A溶液混匀倒平板即可；
若配制200ng/ml的AbA平板，每100ml培养基加入20ul 1mg/ml的 Aureobasidin A溶液混匀倒平板即可。
● 产品参数：
CAS：127785-64-2
英文名称：Aureobasidin A
分子量：1101.13
分子式：C60H92N8O11
纯度：≥98.0%
固体外观：白色粉末
溶解性：易溶于乙醇
注意事项
1.不开封的 Aureobasidin A 溶液（过滤除菌）可在-20℃保存两年，开封后若发现染菌，停止使用。
● 文献
1. Takesako, K. et al. (1993) J. Antibiot. (Tokyo) 46(9):1414–20.
2. Hashida-Okado, T. et al. (1996) Mol. Gen. Genet. 251(2):236–244.
