2M 3-AT 溶液（过滤除菌） - 上海唯地生物技术有限公司

酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液

培养基系列

2M 3-AT 溶液（过滤除菌）

产品说明

3-AT 是酵母HIS3蛋白(His3p)的竞争性抑制剂，HIS3是酵母单杂，双杂，三杂实验的报告基因，HIS3报告基因在酵母中会有微弱的泄露表达（泄露表达：指在报告基因没有被互作激活时的本底表达）；某些蛋白或DNA片段在酵母中有自激活现象，在没有互作发生时也可以激活报告基因，这种自激活现象导致酵母互作实验产生很多假阳性。为了抑制HIS3的本底表达或抑制自激活，在选择HIS3作为报告基因时可以在培养基中同时加入不同浓度梯度的3-AT，以降低背景或减少酵母互作实验的假阳性。唯地生物的2M 3-AT溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可以直接加入培养基使用。

产品规格

货号	规格	目录价
YC8032S	5×5ml	160
YC8032M	100ml	300

产品内容

包装名称	包装含量	保存条件	保存时间
2M 3-AT溶液	25ml/100ml	-20℃	24个月

产品组分与配方

产品组分	分子式/CAS号/分子量	配方	除菌方式
3-氨基-1,2,4-三氮唑(3-AT)	C2H4N4/61-82-5/84.08	2M	0.22um过滤
ddH2O	------	------	------

酵母实验中3-AT的使用方法

1.做酵母互作试验时所使用培养基的筛选严谨度需要做预实验确定，如果所用菌株没有泄露表达，Bait完全没有自激活，在选择HIS3作为报告基因时可以不加3-AT；如果Bait有自激活在选择HIS3作为报告基因时可以在培养基中加不同浓度梯度的3-AT（比如：0、 2.5、 5、7.5、 10、12.5、15 、20、30、40、50、60mM 3-AT）确定合适的筛选严谨度。严谨度太低，会产生很多假阳性；严谨度太高会产生过多假阴性，只能筛选到强的互作，弱的互作无法显示。

2.如何确定合适的筛选严谨度：以pGBKT7-Bait为例，将质粒转化酵母涂在加了不同浓度梯度3-AT的SD/–His/–Trp平板上，要求平板在30度培养3-5天无菌落产生，5-7天无单菌落或产生的菌落数低于50，菌落直径小于1mm。那么符合这种条件平板的最低的3-AT添加量即可作为以HIS3作为报告基因时在培养基中加入3-AT的浓度。

3.液体培养基中直接加入3-AT即可；固体培养基在加热融化后温度低于55度时加入3-AT混匀倒板即可。

产品参数：

CAS：61-82-5

英文名称：3-AT(3-Amino-1,2,4-Triazole)

中文名：3-氨基-1,2,4-三唑

分子量：84.08

分子式：C2H4N4/61-82-5/

纯度：≥99.0%

外观：灰白色粉末

溶解性：易溶于水

不同酵母菌株HIS3报告基因备注：

含有HIS3报告基因，可以使用3-AT调节筛选严谨度的酵母菌株：AH109，Y187(含有pHIS2质粒)，Y2HGold，Y190，NMY51等。

注意事项

1. 2M 3-AT溶液浓度偏高，温度降低时可能会有沉淀析出，将3-AT溶液放37℃预热可重新溶解，也可剧烈摇晃促进溶解。

2. 不开封的2M 3-AT溶液可在-20℃保存2年，开封后若发现染菌，停止使用。

3. 培养基中3-AT浓度不可过高，过高的3-AT浓度易产生假阳性结果，一般酵母互作试验中3-AT的使用浓度不超过60mM，使用浓度超过30mM的3-AT，要设置严格的阴性对照。