酿酒酵母感受态制作/转化试剂盒 - 上海唯地生物技术有限公司

酵母转化/筛选相关试剂和糖溶液

培养基系列

酿酒酵母感受态制作/转化试剂盒

产品说明

酿酒酵母感受态制作/转化试剂盒提供了制作和转化酵母感受态的六种试剂：1.1XTE/LiAc Solution、TE/LiAc 储存液、PEG/LiAc Solution、Carrier DNA、DMSO（过滤除菌）、0.9% (w/v) NaCl Solution；客户需要准备YPDA营养液和酵母菌种平板。本试剂盒适用于AH109、Y187、Y2HGold、Y1HGold、EGY48、NMY51、INVSC1、R5421、Mav203等几乎所有酿酒酵母感受态的制作和转化。1.1XTE/LiAc Solution是一种制作酿酒酵母感受态的buffer，TE起缓冲液的作用，提供稳定的PH值环境，LiAc可使酵母细胞处于一种短暂的感受状态，此时酵母能够摄取外源DNA；DMSO可以保护感受态细胞，提高热激后酵母细胞的成活率；PEG/LiAc和Carrier DNA用于酵母感受态的转化试验。使用唯地生物的酿酒酵母感受态制作/转化试剂盒制作酵母感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率可达10⁴-10⁶ cfu/μg DNA 。

产品规格

货号	规格	目录价
YCK1010S	50T	248
YCK1010M	200T	698

产品组分与配方

包装名称	YCK1010S	包装数量	YCK1010M	包装数量	保存
1.1XTE/LiAc Solution	50ml	1瓶	200ml	1瓶	4℃/24个月
TE/LiAc 储存液	5ml	1瓶	20ml	1瓶	4℃/24个月
PEG/LiAc Solution	25ml	1瓶	100ml	1瓶	4℃/24个月
Carrier DNA (鲑鱼精DNA 10mg/mL)	0.5ml	1管	1ml	2管	-20℃/2年
DMSO（过滤除菌）	1.5ml	1管	5ml	1瓶	4℃/24个月
0.9% (w/v) NaCl Solution	15ml	1瓶	50ml	1瓶	4℃/24个月

使用方法

一，感受态制作方法

1.酵母菌种在YPDA（唯地货号：YM1020S）平板上划线，挑新鲜的单菌落到3ml YPDA Broth（唯地货号：YM1020L、用50ml离心管）中30度，250rpm摇菌12-24h，OD600>2.0即可。

2. 按2%的比列接菌到100ml YPDA Broth（用500ml三角瓶）中，30度，250rpm摇菌到OD600=0.4-1.0，提高酵母细胞浓度可增加转化效率，为了提高菌体浓度可将菌液浓度提高到OD600=1.5。

3.室温700-1000g，5min离心收集菌体，弃上清，用50ml 无菌ddH2O重悬。

4.室温700-1000g，5min离心收集菌体，弃上清，插入冰中，用5-10ml 4℃预冷的1.1ΧTE/liAC重悬，插入冰中静置5min。1500g，30S离心，弃上清，用0.6ml TE/LiAc 储存液重悬，此时可以用来转化酵母文库；也可用1ml TE/LiAc 储存液重悬，分装10-20支感受态，此时可插入冰中直接转化酵母质粒，也可放入-80度超低温冰箱长期保存。

二，感受态转化方法

1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态，步骤如下：取一管（1.5ml离心管、体积小于200ul）Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min以上。

酵母文库质粒普通酵母质粒

2.准备不同大小的离心管，插入冰中---------------------------------------------15ml离心管 1.5ml离心管

依次加入预冷的目的质粒------------------------------------------------------------5-15ug 0.1-2ug

Carrier DNA --------------------------------------------------------------40µl 5-10 µl

酵母感受态---------------------------------------------------------------0.6ml 50-100 µl

PEG/LiAc-----------------------------------------------------------------2.5ml 250-500 µl

吹打几次混匀，30℃水浴-----------------------------------------------------------45 min 30 min

(文库质粒每隔15min翻转6-8次混匀一次；普通质粒每隔10min翻转6-8次混匀一次。）

3.加入无菌的DMSO---------------------------------------------------------------------80ul 10ul

4.将管放42℃水浴---------------------------------------------------------------------20min 15min

(文库质粒每隔10min翻转6-8次混匀一次；普通质粒每隔7.5min翻转6-8次混匀一次。）

5.（可选步骤）4000 rpm离心40s弃上清，加入2XYPDA或YPD Plus重悬----------------3ml 1ml

30℃，200rpm摇菌1.5h。离心 30s弃上清。

6.加入 0.9% (w/v) NaCl重悬，涂板，30℃培养48-120h----------------------------- 5-10ml 0.05ml

注意事项

1. 制作不同数量的感受态，按比例使用各种试剂，本试剂盒可制作100ul/支感受态200支，50ul/支感受态400支。

2. 100ul/支感受态转化时需加入carrier DNA10ul、PEG/LiAc 500ul；50ul/支感受态需加入carrier DNA 5ul、PEG/LiAc 250ul。

3. 此种方法制作的酵母感受态可在-80度长期保存。

4. 不开封的试剂盒各组分可保存两年，开封后若发现染菌，停止使用。