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EPI300二代甘油菌种	Bec-1084	400ul/1支

基因型

F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr.

产品说明

EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂Ⅰ，ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳动物基因组DNA）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在LB平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放37度培养15-20h，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。