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Δalr2 二代甘油菌种	Bsa-1282	400ul/1支

基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 △alr2

产品说明

△alr2菌株来源于BY4741，为配子MATa型，主要用于镁离子转运蛋白的研究。ALR1（Aluminum Resistance 1）、ALR2（Aluminum Resistance 2）：质膜 CorA 家族 Mg²⁺转运蛋白，负责从胞外摄取镁离子；Alr1 是主效高活性镁转运蛋白，优先转运 Mg²⁺，也可介导 Co²⁺、 Mn²⁺进入细胞，不转运 Al³⁺，Al³⁺是它的竞争性抑制剂，抑制镁摄取；ALR1 过表达提升酵母耐铝能力，因此命名 Aluminum Resistance 1，Alr2 为同源蛋白，但转运活性显著弱于 Alr1，转运底物同样以Mg²⁺为主，可转运少量 Co²⁺，同样不转运Al³⁺。△alr2菌株中ALR2基因被完全敲除，但镁离子转运相关表型弱，Alr1 可代偿部分镁摄取功能。△alr2酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、尿嘧啶缺陷型菌株。可直接通过PEG/LiAc将pYES2、pDR195、pDR196等质粒转化进入△alr2细胞内，筛选标志为URA，可用SD/-URA平板进行筛选。

附言：ALR：Aluminum Resistance ，中文名铝抗性蛋白，最初发现该基因过表达可以提高酵母对 Al3+（铝离子）的耐受能力，因此命名；后续才阐明它核心生理功能是质膜镁离子（Mg2+）转运，同时也介导铝、钴离子摄取。

操作方法

1，本产品为二代甘油菌株，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YPDA平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养3-5天，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度地减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，先把接种环打开，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧，可高温灭菌后二次使用。

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。