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∆alr1 ∆alr2 感受态细胞	YC1283S	10×100ul
	YC1283M	50×100ul

基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 △alr1 △alr2

产品说明

△alr1 △alr2菌株来源于BY4741，为配子MATa型，主要用于镁离子转运蛋白的研究中。ALR1（Aluminum Resistance 1）、ALR2（Aluminum Resistance 2）：质膜 CorA 家族 Mg²⁺转运蛋白，负责从胞外摄取镁离子；Alr1 是主效高活性镁转运，优先转运 Mg²⁺，也可介导 Co²⁺、 Mn²⁺进入细胞，不转运 Al³⁺，Al³⁺是它的竞争性抑制剂，抑制镁摄取；ALR1 过表达提升酵母耐铝能力，因此命名 Aluminum Resistance 1，Alr2 为同源蛋白，但转运活性显著弱于 Alr1，转运底物同样以Mg²⁺为主，可转运少量 Co²⁺，同样不转运Al³⁺。△alr1 △alr2菌株中ALR1、ALR2基因被完全敲除，镁离子转运能力降低，在低镁培养基无法生长，是发现和研究镁离子转运蛋白的高效试验平台。△alr1 △alr2酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、尿嘧啶缺陷型菌株。可直接通过PEG/LiAc将pYES2、pDR195、pDR196等质粒转化进入△alr1 △alr2细胞内，筛选标志为URA，可用SD/-URA平板进行筛选。唯地生物生产的△alr1 △alr2感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，Amp^R）检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

附言：ALR：Aluminum Resistance ，中文名铝抗性蛋白，最初发现该基因过表达可以提高酵母对 Al3+（铝离子）的耐受能力，因此命名；后续才阐明它核心生理功能是质膜镁离子（Mg2+）转运，同时也介导铝、钴离子摄取。

操作方法

1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。

2. 取100 µl冰上融化的△zrc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.1-2 µg（质粒体积不超过感受态体积的10%），预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH₂O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。

5. ddH₂O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择SD缺陷型平板），29℃培养48-96 h。

注意事项

1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。

2. 取100 µl冰上融化的△alr1 △alr2感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.1-2 µg（质粒体积不超过感受态体积的10%），预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH₂O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。