酿酒酵母感受态细胞
产品规格 （CAT#: YC1103）
△fet4 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pYES2 (control vector, 10 ng/μl) : 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) : 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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△fet4 感受态细胞 |
YC1103S |
10×100ul |
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| YC1103M | 50×100ul |
基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 △fet4
产品说明
△fet4菌株来源于BY4741，为配子MATa型，主要应用于二价铁离子转运蛋白的研究。FET4（YMR319C），编码质膜低亲和二价金属转运蛋白 Fet4p，定位细胞质膜，为多跨膜蛋白，底物：Fe²⁺为主，同时转运 Cu²⁺、Zn²⁺、Cd²⁺等二价阳离子。∆fet4 单基因突变体在富铁环境：生长基本不受影响；酵母高亲和铁吸收通路 Fet3/Ftr1 可以完全代偿。在低铁、厌氧条件下：低亲和铁摄取能力下降，胞内铁含量降低，表型才会显现。附加特性：Fet4 是 Cd²⁺进入细胞的通道之一；∆fet4 可减轻镉离子毒性。△fet4酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2、pDR195、pDR196等质粒转化进入△fet4细胞内，筛选标志为URA，可用SD-URA平板进行筛选。唯地生物生产的△fet4感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的 △fet4感受态细胞，依次加入预冷的质粒0.1-2 µg（质粒体积不超过感受态体积的10%），预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择SD缺陷型平板），29℃培养48-96 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量，同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
2. 酵母为真核生物，不易长期保存，建议保存时间不超过90天。
3. △fet4酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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△fet4 感受态细胞 |
YC1103S |
10×100ul |
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| YC1103M | 50×100ul |
基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 △fet4
产品说明
△fet4菌株来源于BY4741，为配子MATa型，主要应用于二价铁离子转运蛋白的研究。FET4（YMR319C），编码质膜低亲和二价金属转运蛋白 Fet4p，定位细胞质膜，为多跨膜蛋白，底物：Fe²⁺为主，同时转运 Cu²⁺、Zn²⁺、Cd²⁺等二价阳离子。∆fet4 单基因突变体在富铁环境：生长基本不受影响；酵母高亲和铁吸收通路 Fet3/Ftr1 可以完全代偿。在低铁、厌氧条件下：低亲和铁摄取能力下降，胞内铁含量降低，表型才会显现。附加特性：Fet4 是 Cd²⁺进入细胞的通道之一；∆fet4 可减轻镉离子毒性。△fet4酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2、pDR195、pDR196等质粒转化进入△fet4细胞内，筛选标志为URA，可用SD-URA平板进行筛选。唯地生物生产的△fet4感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的 △fet4感受态细胞，依次加入预冷的质粒0.1-2 µg（质粒体积不超过感受态体积的10%），预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择SD缺陷型平板），29℃培养48-96 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量，同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
2. 酵母为真核生物，不易长期保存，建议保存时间不超过90天。
3. △fet4酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆。
引用唯地生物产品SCI文献统计信息
