大肠杆菌/农杆菌培养基
产品说明
TK 诱导培养基，也叫M9 casamino acids 培养基(配方相同)，是一款针对大肠杆菌色氨酸（trp）启动子表达系统设计的即用型诱导培养基。培养基通过色氨酸类似物 —— 吲哚丙烯酸（Indoleacrylic acid，IA）解除 trp 启动子的阻遏，配合不含色氨酸的酪蛋白氨基酸（casamino acids）碳氮源体系，实现目标蛋白（TK 系列载体 / 菌株）的高效诱导表达。适用于 trp 启动子驱动的蛋白表达、发酵培养及诱导条件优化实验。唯地生物开发的TK 诱导培养基经试验验证，可适配TKB1大肠杆菌的酪氨酸激酶诱导表达试验。
产品规格
包装名称
货号
包装含量
目录价
TK诱导培养基
DM1050-03
200g (10.5g配1L TK诱导液体培养基)
680
200mL碳源母液
YC8026L-02
40mL吲哚丙烯酸诱导剂
产品内容
TK诱导培养基
200g (10.5g配1L TK诱导液体培养基)
1瓶
200mL碳源母液
1瓶
1瓶
避光、4度/1个月；-20度/6个月
包装名称
包装含量
包装数量
保存条件/时间
室温干燥/12个月
室温干燥/12个月
40mL吲哚丙烯酸诱导剂
产品组分
配方（1L）
产品组分
配方（1L）
Na₂HPO₄
6 g
1 M MgSO₄·7H2O
1 ml
KH₂PO₄
3 g
50% (w/v) glucose
4 ml
NH₄Cl
1 g
20% casamino acids（不含Trp）
5 ml
NaCl
0.5 g
0.5% thiamine-HCl
0.1 ml
CaCl₂
3 mg
5 mg/ml indoleacrylic acid
2 ml
PH值( 25°C)：7.0±0.2
作用机理
Trp 启动子受TrpR 阻遏蛋白负调控：培养基中有色氨酸时，色氨酸结合TrpR ，形成共阻遏物，关闭Trp 启动子；吲哚丙烯酸（IA）：是 Trp 的结构类似物，可结合TrpR 阻遏蛋白但不能激活 TrpR 行使阻遏功能，从而解除阻遏，Trp 启动子正常驱动目标蛋白表达；同时TK诱导培养基中的酪蛋白氨基酸（不含色氨酸，含丰富的微量元素和维生素），从源头避免 Trp 触发阻遏，保证诱导的稳定高效。
附言：trp 启动子属中等强度启动子（表达强度约为 T7 启动子的 1/10 左右），适用于需要温和、可控、可溶性表达的体系，蛋白的可溶性优于T7蛋白表达系统，蛋白表达量低于T7蛋白表达系统。
使用方法
一．TKB1菌株诱导方法：取TK诱导培养基粉剂10.5 g，加双蒸水988ml溶解后，121℃-20min高压灭菌，灭菌后温度降到55度以下加入碳源母液10.1 mL、吲哚丙烯酸诱导剂2 mL。
二．普通色氨酸启动子诱导蛋白表达方法：
1. 小摇：挑单克隆接种，使用含对应抗生素的 LB 或者 TK诱导培养基（不含色氨酸、诱导剂）37 ℃、200rpm摇菌12-16h，OD600 >2.0停止小摇；
2. 大摇：按2%的比例接菌到TK诱导培养基（不含色氨酸、诱导剂），37 ℃、200rpm摇菌， 培养至OD600 = 0.4 0.8；
3. 加入吲哚丙烯酸诱导剂至终浓度 10 50 μg/mL；37 ℃、200rpm继续诱导2 4 h；也可以设置16-37℃的温度梯度，10 50 μg/mL的诱导剂梯度，优化诱导条件。
4. 离心收菌，检测蛋白。
注意事项
1. TK诱导培养基需先补水，121℃-20min高压灭菌后使用；若发现有严重吸潮现象，停止使用。
2. TK诱导培养基加入PH7.0的去离子水后PH约7.0，可不调PH值直接使用。
3. 若配制少于1L，按每100ml加1.05g培养基的比例加入即可，剩余培养基封口后放干燥处保存。
产品规格
包装名称
货号
包装含量
目录价
TK诱导培养基
DM1050-03
200g (10.5g配1L TK诱导液体培养基)
680
200mL碳源母液
YC8026L-02
40mL吲哚丙烯酸诱导剂
产品内容
TK诱导培养基
200g (10.5g配1L TK诱导液体培养基)
1瓶
200mL碳源母液
1瓶
1瓶
避光、4度/1个月；-20度/6个月
包装名称
包装含量
包装数量
保存条件/时间
室温干燥/12个月
室温干燥/12个月
40mL吲哚丙烯酸诱导剂
产品组分
配方（1L）
产品组分
配方（1L）
Na₂HPO₄
6 g
1 M MgSO₄·7H2O
1 ml
KH₂PO₄
3 g
50% (w/v) glucose
4 ml
NH₄Cl
1 g
20% casamino acids（不含Trp）
5 ml
NaCl
0.5 g
0.5% thiamine-HCl
0.1 ml
CaCl₂
3 mg
5 mg/ml indoleacrylic acid
2 ml
PH值( 25°C)：7.0±0.2
作用机理
Trp 启动子受TrpR 阻遏蛋白负调控：培养基中有色氨酸时，色氨酸结合TrpR ，形成共阻遏物，关闭Trp 启动子；吲哚丙烯酸（IA）：是 Trp 的结构类似物，可结合TrpR 阻遏蛋白但不能激活 TrpR 行使阻遏功能，从而解除阻遏，Trp 启动子正常驱动目标蛋白表达；同时TK诱导培养基中的酪蛋白氨基酸（不含色氨酸，含丰富的微量元素和维生素），从源头避免 Trp 触发阻遏，保证诱导的稳定高效。
附言：trp 启动子属中等强度启动子（表达强度约为 T7 启动子的 1/10 左右），适用于需要温和、可控、可溶性表达的体系，蛋白的可溶性优于T7蛋白表达系统，蛋白表达量低于T7蛋白表达系统。
使用方法
一．TKB1菌株诱导方法：取TK诱导培养基粉剂10.5 g，加双蒸水988ml溶解后，121℃-20min高压灭菌，灭菌后温度降到55度以下加入碳源母液10.1 mL、吲哚丙烯酸诱导剂2 mL。
二．普通色氨酸启动子诱导蛋白表达方法：
1. 小摇：挑单克隆接种，使用含对应抗生素的 LB 或者 TK诱导培养基（不含色氨酸、诱导剂）37 ℃、200rpm摇菌12-16h，OD600 >2.0停止小摇；
2. 大摇：按2%的比例接菌到TK诱导培养基（不含色氨酸、诱导剂），37 ℃、200rpm摇菌， 培养至OD600 = 0.4 0.8；
3. 加入吲哚丙烯酸诱导剂至终浓度 10 50 μg/mL；37 ℃、200rpm继续诱导2 4 h；也可以设置16-37℃的温度梯度，10 50 μg/mL的诱导剂梯度，优化诱导条件。
4. 离心收菌，检测蛋白。
注意事项
1. TK诱导培养基需先补水，121℃-20min高压灭菌后使用；若发现有严重吸潮现象，停止使用。
2. TK诱导培养基加入PH7.0的去离子水后PH约7.0，可不调PH值直接使用。
3. 若配制少于1L，按每100ml加1.05g培养基的比例加入即可，剩余培养基封口后放干燥处保存。
引用唯地生物产品SCI文献统计信息
