大肠杆菌质粒提取试剂盒
产品说明
六步标准流程：P1 / P2 / P3 碱裂解 → 离心澄清 → 离子交换柱纯化 → 异丙醇沉淀 → 70% 乙醇洗涤 → 重悬溶解。
与常规试剂盒的关键差异只在第 3 步：常规试剂盒在这里是硅胶膜柱，本品换成大孔径阴离子交换柱，既解决 > 130 kb DNA 的结合与洗脱问题，又在洗脱前把 gDNA、RNA 与内毒素洗掉，洗脱下来的直接是纯品。各步离心力、时长与缓冲液体积详见说明书。
三个操作特点：① 零剪切——全程宽口吸头、缓慢颠倒，无涡旋、无剧烈吹打，保住 ccc 构型；② 无需特殊设备——常规台式离心机即可完成，不依赖 CsCl 密度梯度或超速离心机；③ 低内毒素、无 gDNA。
产品规格
名称
货号
规格
目录价
NovaBac™ 大质粒 / Bacmid 中量提取试剂盒
EVK3210M
10 次 / 盒
980
产品内容
组分
货号
装量
储存温度
NovaBac™ P1 / P2 / P3
/
各 100 mL
P1 2–8 ℃（加 RNase A 后）；P2、P3 室温
NovaBac™ Dilution Buffer
/
500 mL
室温
NovaBac™ Equilibration / Wash Buffer
/
400 mL × 2
室温
NovaBac™ Elution Buffer
/
150 mL
室温
RNase A（10 mg/mL）
GR5013 1 mL
–20 ℃
NovaBac™ 纯化柱（含 5 mL 填料）
CO1301
10 支
2–8 ℃，严禁冻存
TE
/
5 ml
2–8 ℃
本试剂盒采用改良碱裂解法结合 DEAE 弱阴离子交换层析，专为常规硅胶膜离心柱难以胜任的大分子量质粒设计。以开放柱床、重力流为核心，全流程避免高剪切操作，可在保持大质粒完整性的前提下获得可直接用于酶切、测序、电转化与转染的 DNA。
▍关键控制点：① 全程禁止涡旋，仅温和颠倒混匀；② 全程使用宽口枪头；③ 上样前必须用稀释缓冲液把离子强度降下来，否则 DNA 不结合树脂。
推荐操作步骤
一、 使用前准备
● 向 P1 中加入 RNase A 并混匀，标注加入日期，2–8 ℃ 保存；RNase A 处理为强制步骤。
● 检查 P2 是否析出 SDS 沉淀，必要时 37 ℃ 水浴至澄清并冷却至室温；P3 提前 2–8 ℃ 预冷。
● 将洗脱缓冲液置于 50 ℃ 水浴预热；准备宽口枪头（常规枪头剪去前端 3–5 mm）。
二、 裂解、澄清与上样调节
1. 4 ℃、6,000 × g 离心 5 min 收集 150 mL 培养菌体，彻底弃去上清。
2. 加入 8 mL P1 充分重悬至无颗粒（此步为全流程唯一允许涡旋的步骤）。
3. ★ 加入 8 mL P2，立即温和颠倒混匀 4–6 次，室温静置不超过 3 min。
4. 加入 8 mL 预冷 P3，立即温和颠倒混匀 6–8 次至形成均匀白色絮状沉淀，冰浴静置 15 min。
5. 4 ℃、12,000 × g 离心 20 min；若上清仍浑浊，经 2 层无菌纱布或折叠滤纸重力过滤。
6. ★ 加入 1.5 倍体积的 NovaBac™ Dilution Buffer（约 36 mL），温和颠倒混匀。
三、 柱层析与回收
1. 用 25–40 mL Equilibration / Wash Buffer 平衡柱床，流速 1–2 mL/min（重力流）。
2. 将上样液沿柱壁缓慢加入，全程重力流出；建议保留流穿液以备排查。
3. 用 25–40 mL Equilibration / Wash Buffer 洗柱，去除蛋白质、多糖与松散结合杂质。
4. ★ 用 15 mL 预热至 50 ℃ 的 Elution Buffer 洗脱，每管 1 mL 分管收集，合并含 DNA 的高峰管。
5. 加入 0.7 倍体积室温异丙醇，室温静置 10 min 后立即 4 ℃、≥ 12,000 × g 离心 30 min（请勿 –20 ℃ 沉淀）。
6. 加 8 mL 室温 70 % 乙醇洗涤后离心 10 min，室温风干 5–10 min（切勿过度干燥），加 200–500 μL TE 或无核酸酶水，4 ℃ 静置过夜复溶。
产品规格
名称
货号
规格
目录价
NovaBac™ 大质粒 / Bacmid 中量提取试剂盒
EVK3210M
10 次 / 盒
980
产品内容
组分
货号
装量
储存温度
NovaBac™ P1 / P2 / P3
/
各 100 mL
P1 2–8 ℃（加 RNase A 后）；P2、P3 室温
NovaBac™ Dilution Buffer
/
500 mL
室温
NovaBac™ Equilibration / Wash Buffer
/
400 mL × 2
室温
NovaBac™ Elution Buffer
/
150 mL
室温
RNase A（10 mg/mL）
GR5013 1 mL
–20 ℃
NovaBac™ 纯化柱（含 5 mL 填料）
CO1301
10 支
2–8 ℃，严禁冻存
TE
/
5 ml
2–8 ℃
本试剂盒采用改良碱裂解法结合 DEAE 弱阴离子交换层析，专为常规硅胶膜离心柱难以胜任的大分子量质粒设计。以开放柱床、重力流为核心，全流程避免高剪切操作，可在保持大质粒完整性的前提下获得可直接用于酶切、测序、电转化与转染的 DNA。
▍关键控制点：① 全程禁止涡旋，仅温和颠倒混匀；② 全程使用宽口枪头；③ 上样前必须用稀释缓冲液把离子强度降下来，否则 DNA 不结合树脂。
推荐操作步骤
一、 使用前准备
● 向 P1 中加入 RNase A 并混匀，标注加入日期，2–8 ℃ 保存；RNase A 处理为强制步骤。
● 检查 P2 是否析出 SDS 沉淀，必要时 37 ℃ 水浴至澄清并冷却至室温；P3 提前 2–8 ℃ 预冷。
● 将洗脱缓冲液置于 50 ℃ 水浴预热；准备宽口枪头（常规枪头剪去前端 3–5 mm）。
二、 裂解、澄清与上样调节
1. 4 ℃、6,000 × g 离心 5 min 收集 150 mL 培养菌体，彻底弃去上清。
2. 加入 8 mL P1 充分重悬至无颗粒（此步为全流程唯一允许涡旋的步骤）。
3. ★ 加入 8 mL P2，立即温和颠倒混匀 4–6 次，室温静置不超过 3 min。
4. 加入 8 mL 预冷 P3，立即温和颠倒混匀 6–8 次至形成均匀白色絮状沉淀，冰浴静置 15 min。
5. 4 ℃、12,000 × g 离心 20 min；若上清仍浑浊，经 2 层无菌纱布或折叠滤纸重力过滤。
6. ★ 加入 1.5 倍体积的 NovaBac™ Dilution Buffer（约 36 mL），温和颠倒混匀。
三、 柱层析与回收
1. 用 25–40 mL Equilibration / Wash Buffer 平衡柱床，流速 1–2 mL/min（重力流）。
2. 将上样液沿柱壁缓慢加入，全程重力流出；建议保留流穿液以备排查。
3. 用 25–40 mL Equilibration / Wash Buffer 洗柱，去除蛋白质、多糖与松散结合杂质。
4. ★ 用 15 mL 预热至 50 ℃ 的 Elution Buffer 洗脱，每管 1 mL 分管收集，合并含 DNA 的高峰管。
5. 加入 0.7 倍体积室温异丙醇，室温静置 10 min 后立即 4 ℃、≥ 12,000 × g 离心 30 min（请勿 –20 ℃ 沉淀）。
6. 加 8 mL 室温 70 % 乙醇洗涤后离心 10 min，室温风干 5–10 min（切勿过度干燥），加 200–500 μL TE 或无核酸酶水，4 ℃ 静置过夜复溶。
