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昆虫细胞蛋白表达/纯化

● 昆虫细胞裂解试剂盒
NovaLyse™ 昆虫细胞直接裂解试剂盒(10×)

产品说明

10× 浓缩液,按培养物 1/10 体积直接加入即可,无需收集细胞、无需 PBS 洗涤、无需冰上操作、无需超声破碎、无需高速离心澄清。

三步流程:① 直接加入——向培养物按 1/10 体积直接加入 10× 裂解液;② 室温孵育——室温静置 10–15 min,无需冰浴、无需超声;③ 直接上样——裂解液直接上 Ni 柱,无需高速离心澄清。

与传统超声 / 机械裂解流程的对比:单次裂解耗时 90 min → 15 min;专用设备 0 台(无超声仪、无高速离心机);全程室温操作,无需冰浴。传统流程需要收集细胞离心 5 min、PBS 洗 1–2 次再离心、冰上重悬加抑制剂、冰浴分次超声、12,000–20,000 × g 离心 20–30 min、转移上清上样共六步,样品还面临发热与损失。

内部平行实测(同一批细胞,以超声为 100% 基准):直接裂解在蛋白得率与 LacZ 相对酶活(ONPG 法)两项指标上均超过超声法;裂解产物可直接上样做胶内荧光(in-gel fluorescence)检测。



产品规格


名称
货号
规格
目录价
NovaLyse™ 昆虫细胞直接裂解试剂盒(10×)
INK3301
一盒
2300


产品内容


编号
组分名称
货号
规格
保存条件
目录价
A
NovaLyse™ 昆虫细胞直接裂解试剂(10×)
INL3301
50 mL × 1 室温
1200
B
Benzonase Nuclease
GR5015
1 mL × 1
−20 ℃
800
C
500× Protease Inhibitor Cocktail(EDTA-free)
GR4001
1 mL × 1
−20 ℃
200
D
还原剂 DTT(1 M)
GR4011 1 mL × 1
−20 ℃
100

储存提示:核酸酶、蛋白酶抑制剂与 DTT 于 −20 ℃ 保存,避免反复冻融,取用时置于冰上;首次开盖请记录开封日期,具体有效期以瓶签为准。


产品简介


     传统裂解需要收集细胞、洗涤、冰上重悬、超声破碎再高速离心澄清,整套流程约 90 分钟,还要占用超声仪与高速离心机。本试剂盒把这一整段流程压缩为一步:按 1/10 体积把 10× 裂解试剂直接加进培养物,室温孵育约 15 分钟,胞内与胞外蛋白同步回收,裂解产物无需超速离心澄清即可直接上 Ni-NTA 亲和柱。


     ▍核心优势:一步直接裂解,无需收集细胞与更换培养基;胞内胞外一并回收;配方不含 DTT、EDTA、EGTA,不破坏树脂的金属螯合结构。


推荐操作步骤


1. 取表达目标蛋白的昆虫细胞培养物,记录体积。无需收集细胞、无需更换培养基。

2. 按 1/10 体积加入 10× 裂解试剂(组分 A),温和颠倒混匀。

3. 加入 Benzonase 核酸酶(组分 B)降低核酸释放导致的粘度;按需加入 EDTA-free 蛋白酶抑制剂(组分 C)至 1×、还原剂 DTT(组分 D,终浓度 0.5–1 mM)。

4. 室温孵育约 15 分钟,期间温和颠倒数次。无需离心澄清。

5. 建议取样确认裂解液 pH 处于 7.5–8.0(近中性偏碱),以利后续 Ni-NTA 结合。

6. 裂解液可直接上样至 NovaPure™ His 标签蛋白小量纯化试剂盒(货号:INK3401),无需透析或换液。


关键注意事项:

pH 控制:加入裂解试剂后确认 pH 在 7.5–8.0;昆虫培养基偏酸时如 pH 偏低,可适当调节后再上柱。

核酸降解:务必加入核酸酶以降低粘度,避免上柱堵塞与非特异聚集。

咪唑去除:洗脱后如用于下游功能实验,请脱盐或透析去除咪唑。


产品规格


名称
货号
规格
目录价
NovaLyse™ 昆虫细胞直接裂解试剂盒(10×)
INK3301
一盒
2300


产品内容


编号
组分名称
货号
规格
保存条件
目录价
A
NovaLyse™ 昆虫细胞直接裂解试剂(10×)
INL3301
50 mL × 1 室温
1200
B
Benzonase Nuclease
GR5015
1 mL × 1
−20 ℃
800
C
500× Protease Inhibitor Cocktail(EDTA-free)
GR4001
1 mL × 1
−20 ℃
200
D
还原剂 DTT(1 M)
GR4011 1 mL × 1
−20 ℃
100

储存提示:核酸酶、蛋白酶抑制剂与 DTT 于 −20 ℃ 保存,避免反复冻融,取用时置于冰上;首次开盖请记录开封日期,具体有效期以瓶签为准。


产品简介


     传统裂解需要收集细胞、洗涤、冰上重悬、超声破碎再高速离心澄清,整套流程约 90 分钟,还要占用超声仪与高速离心机。本试剂盒把这一整段流程压缩为一步:按 1/10 体积把 10× 裂解试剂直接加进培养物,室温孵育约 15 分钟,胞内与胞外蛋白同步回收,裂解产物无需超速离心澄清即可直接上 Ni-NTA 亲和柱。


     ▍核心优势:一步直接裂解,无需收集细胞与更换培养基;胞内胞外一并回收;配方不含 DTT、EDTA、EGTA,不破坏树脂的金属螯合结构。


推荐操作步骤


1. 取表达目标蛋白的昆虫细胞培养物,记录体积。无需收集细胞、无需更换培养基。

2. 按 1/10 体积加入 10× 裂解试剂(组分 A),温和颠倒混匀。

3. 加入 Benzonase 核酸酶(组分 B)降低核酸释放导致的粘度;按需加入 EDTA-free 蛋白酶抑制剂(组分 C)至 1×、还原剂 DTT(组分 D,终浓度 0.5–1 mM)。

4. 室温孵育约 15 分钟,期间温和颠倒数次。无需离心澄清。

5. 建议取样确认裂解液 pH 处于 7.5–8.0(近中性偏碱),以利后续 Ni-NTA 结合。

6. 裂解液可直接上样至 NovaPure™ His 标签蛋白小量纯化试剂盒(货号:INK3401),无需透析或换液。


关键注意事项:

pH 控制:加入裂解试剂后确认 pH 在 7.5–8.0;昆虫培养基偏酸时如 pH 偏低,可适当调节后再上柱。

核酸降解:务必加入核酸酶以降低粘度,避免上柱堵塞与非特异聚集。

咪唑去除:洗脱后如用于下游功能实验,请脱盐或透析去除咪唑。



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