昆虫细胞蛋白表达/纯化
产品说明
基于 Tn7 转座在大肠杆菌（DH10Bac）内完成重组的经典 BEVS 路线，蓝白斑筛选、白斑即阳性。
六步流程与周期（合计 21–28 天）：① 目的基因载体构建（pNovaBac 穿梭质粒，3 d）→ ② DH10Bac 转座（4 d）→ ③ Bacmid 抽提鉴定（蓝白斑筛选 + PCR 验证及测序，3 d）→ ④ 转染 Sf9 获得 P0 病毒（NovaFect™，5 d）→ ⑤ P1 扩增与测滴度（P0 加入 Sf9，MOI 0.05–0.1 pfu/cell，5 d；病毒滴度随代次增加而升高，但不可超过 3 代）→ ⑥ 感染表达（MOI 5–10 pfu/cell，感染后 2–3 天收样，4 d）。
宿主选择：胞内蛋白与膜蛋白用 Sf9/Sf21；分泌蛋白用 High Five。培养基：Nova 921 SFM™ 或 Nova SFM™。
四个优势：产量最高——病毒扩增放大表达信号，适合 mg 级以上制备；承载力强——可表达大片段、多基因、多亚基复合物；工艺可放大——从摇瓶到生物反应器路径成熟；病毒母液一次构建可反复使用。
已验证示例：EGFP（pNovaBac-gfp，264 aa）与 β2AR（pNovaBac-β2AR，ADRB2，413 aa，GPCR / 7-TM 膜蛋白）均可在本系统中表达。阳性对照质粒随盒提供，第一次做 BEVS 也能区分“构建体不行”与“操作不行”。
产品规格
名称
货号
规格
目录价
NovaBac™ 杆状病毒表达系统
INK1001
1箱
7690
产品内容
箱号
成分
货号
规格
保存条件
目录价
Box 1
Sf9 昆虫细胞
Bic1009
1 mL × 1 支
–80 ℃（2 年）或液氮长期
1600
Box 2
pNovaBac-gfp / -mel / -Dual / -chaperone 1
PIC1011 / 1012 / 1013 / 1021
各 20 μL × 1 支
–20 ℃
800/800/800/1000
Box 3
DH10Bac 感受态细胞
DL1071S
100 μL × 10 支
−80 ℃
240
Box 4
X-gal / IPTG / 抗生素 A（Tet）/ 抗生素 B（Kan、Gen）
YC8002S / YC8024S / YC9050L-11 / YC9020L-11
各 1 支
–20 ℃
500/60/60/60
Box 5
NovaFect™ 昆虫细胞转染试剂 + 稀释液
INT1001M
1.5 mL + 25 mL
4 ℃（勿冻）
1350
Box 6
Nova 921 SFM™ 昆虫细胞无血清培养基
IM1001S
500 mL × 1 瓶
4 ℃（勿冻）
420
整套货号：NovaBac™ 杆状病毒表达系统整套 Kit （货号：INK1001）；整套运输：干冰 + 冰袋。
产品简介
对比项
传统同源重组系统
NovaBac™ 系统
重组场所
昆虫细胞内
大肠杆菌内（Tn7 转座）
重组效率
0.1 %–1 %
> 99 %（白色菌落即阳性）
筛选方式
多轮蚀斑纯化
蓝白斑 + 三抗筛选
首次拿到病毒
3–6 周
7–10 天
P0 滴度
需多轮放大
P0 即达 10⁶–10⁷ pfu/mL
传统 BEVS 的重组病毒必须在昆虫细胞内靠同源重组产生，阳性率只有 0.1 %–1 %，随后还要做多轮蚀斑纯化，一套流程通常要 3–6 周。NovaBac™ 把这一步搬到大肠杆菌中完成：利用 Tn7 位点特异性转座，在 DH10Bac 中直接将目的基因整合进 Bacmid，转座成功与否由蓝白斑一眼可辨 —— 白色菌落即为阳性，阳性率 > 99 %。
推荐操作步骤
一、 重组 Bacmid 制备
1. 将验证正确的 pNovaBac 重组质粒转化 DH10Bac 感受态：冰浴 30 min → 42 ℃ 热击 45 秒 → 冰上 2 min → 加 900 μL SOC → 37 ℃、225 rpm 复苏 4 小时（必须，转座需要时间）。
2. 做 10⁻¹–10⁻³ 系列稀释，各取 100 μL 涂布于三抗 + X-gal / IPTG 选择平板（Kan 50、Gm 7、Tet 10 μg/mL；X-gal 100 μg/mL、IPTG 40 μg/mL）。
3. 37 ℃ 培养 24–48 小时（务必 ≥ 36 小时以充分显色，避免假白斑），挑取最白、最大、最孤立的白色菌落划线复筛一次。
4. 挑单白斑接种含三抗的液体 LB，37 ℃、250 rpm 过夜；用 NovaBac™ 大质粒 / Bacmid 中量提取试剂盒（货号：EVK3210M）提取 Bacmid（勿用硅胶膜柱，勿涡旋）。
5. 用 pUC/M13 通用引物 PCR 验证转座：未转座 bacmid 约 300 bp；含目的基因者约 2300 bp + 插入片段大小。
二、 转染 Sf9 制备 P0 病毒（6 孔板，单孔）
1. 接种 1 × 10⁶ Sf9 细胞 / 孔于 2 mL Nova 921 SFM™ 中，室温静置 ≥ 15 min 贴壁。
2. 取 200 μL NovaFect™ 转染稀释液，加入 16 μg Bacmid 轻弹混匀；再加入 8 μL NovaFect™ 转染试剂轻弹混匀，室温静置 15 min。
3. 将混合物逐滴均匀加至细胞中，27 ℃ 孵育 3–5 天（转染时切勿加入抗生素、无需换液）。
4. 出现晚期至极晚期感染特征时收获：500 × g 离心 5 min，上清即 P0 病毒原液（10⁶–10⁷ pfu/mL），4 ℃ 避光保存并加血清至 2 %。
三、 病毒扩增与表达
1. 扩增：Sf9 稀释至 2 × 10⁶ cells/mL，按 MOI 0.05–0.1 加入 P0，27 ℃ 摇床培养 72–96 小时，60–80 % 细胞死亡时收获，得 P1（10⁷–10⁸ pfu/mL）。最高使用代次 P3。
2. 表达：用 P1 / P2 感染 1 × 10⁶–2 × 10⁶ cells/mL 的 Sf9 / Sf21 / High Five，起始 MOI 5–10；分泌型蛋白 30–72 h、胞内蛋白 48–96 h 收获。
3. 接种量计算：病毒体积 = 期望 MOI × 总细胞数 ÷ 病毒滴度。
产品规格
名称
货号
规格
目录价
NovaBac™ 杆状病毒表达系统
INK1001
1箱
7690
产品内容
箱号
成分
货号
规格
保存条件
目录价
Box 1
Sf9 昆虫细胞
Bic1009
1 mL × 1 支
–80 ℃（2 年）或液氮长期
1600
Box 2
pNovaBac-gfp / -mel / -Dual / -chaperone 1
PIC1011 / 1012 / 1013 / 1021
各 20 μL × 1 支
–20 ℃
800/800/800/1000
Box 3
DH10Bac 感受态细胞
DL1071S
100 μL × 10 支
−80 ℃
240
Box 4
X-gal / IPTG / 抗生素 A（Tet）/ 抗生素 B（Kan、Gen）
YC8002S / YC8024S / YC9050L-11 / YC9020L-11
各 1 支
–20 ℃
500/60/60/60
Box 5
NovaFect™ 昆虫细胞转染试剂 + 稀释液
INT1001M
1.5 mL + 25 mL
4 ℃（勿冻）
1350
Box 6
Nova 921 SFM™ 昆虫细胞无血清培养基
IM1001S
500 mL × 1 瓶
4 ℃（勿冻）
420
整套货号：NovaBac™ 杆状病毒表达系统整套 Kit （货号：INK1001）；整套运输：干冰 + 冰袋。
产品简介
对比项
传统同源重组系统
NovaBac™ 系统
重组场所
昆虫细胞内
大肠杆菌内（Tn7 转座）
重组效率
0.1 %–1 %
> 99 %（白色菌落即阳性）
筛选方式
多轮蚀斑纯化
蓝白斑 + 三抗筛选
首次拿到病毒
3–6 周
7–10 天
P0 滴度
需多轮放大
P0 即达 10⁶–10⁷ pfu/mL
传统 BEVS 的重组病毒必须在昆虫细胞内靠同源重组产生，阳性率只有 0.1 %–1 %，随后还要做多轮蚀斑纯化，一套流程通常要 3–6 周。NovaBac™ 把这一步搬到大肠杆菌中完成：利用 Tn7 位点特异性转座，在 DH10Bac 中直接将目的基因整合进 Bacmid，转座成功与否由蓝白斑一眼可辨 —— 白色菌落即为阳性，阳性率 > 99 %。
推荐操作步骤
一、 重组 Bacmid 制备
1. 将验证正确的 pNovaBac 重组质粒转化 DH10Bac 感受态：冰浴 30 min → 42 ℃ 热击 45 秒 → 冰上 2 min → 加 900 μL SOC → 37 ℃、225 rpm 复苏 4 小时（必须，转座需要时间）。
2. 做 10⁻¹–10⁻³ 系列稀释，各取 100 μL 涂布于三抗 + X-gal / IPTG 选择平板（Kan 50、Gm 7、Tet 10 μg/mL；X-gal 100 μg/mL、IPTG 40 μg/mL）。
3. 37 ℃ 培养 24–48 小时（务必 ≥ 36 小时以充分显色，避免假白斑），挑取最白、最大、最孤立的白色菌落划线复筛一次。
4. 挑单白斑接种含三抗的液体 LB，37 ℃、250 rpm 过夜；用 NovaBac™ 大质粒 / Bacmid 中量提取试剂盒（货号：EVK3210M）提取 Bacmid（勿用硅胶膜柱，勿涡旋）。
5. 用 pUC/M13 通用引物 PCR 验证转座：未转座 bacmid 约 300 bp；含目的基因者约 2300 bp + 插入片段大小。
二、 转染 Sf9 制备 P0 病毒（6 孔板，单孔）
1. 接种 1 × 10⁶ Sf9 细胞 / 孔于 2 mL Nova 921 SFM™ 中，室温静置 ≥ 15 min 贴壁。
2. 取 200 μL NovaFect™ 转染稀释液，加入 16 μg Bacmid 轻弹混匀；再加入 8 μL NovaFect™ 转染试剂轻弹混匀，室温静置 15 min。
3. 将混合物逐滴均匀加至细胞中，27 ℃ 孵育 3–5 天（转染时切勿加入抗生素、无需换液）。
4. 出现晚期至极晚期感染特征时收获：500 × g 离心 5 min，上清即 P0 病毒原液（10⁶–10⁷ pfu/mL），4 ℃ 避光保存并加血清至 2 %。
三、 病毒扩增与表达
1. 扩增：Sf9 稀释至 2 × 10⁶ cells/mL，按 MOI 0.05–0.1 加入 P0，27 ℃ 摇床培养 72–96 小时，60–80 % 细胞死亡时收获，得 P1（10⁷–10⁸ pfu/mL）。最高使用代次 P3。
2. 表达：用 P1 / P2 感染 1 × 10⁶–2 × 10⁶ cells/mL 的 Sf9 / Sf21 / High Five，起始 MOI 5–10；分泌型蛋白 30–72 h、胞内蛋白 48–96 h 收获。
3. 接种量计算：病毒体积 = 期望 MOI × 总细胞数 ÷ 病毒滴度。
引用唯地生物产品SCI文献统计信息
