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SHuffle T7 E. coli pRARE二代甘油菌种	Bes-2032	400ul/1支

基因型

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产品说明

SHuffle T7 E. coli pRARE来源于SHuffle T7 E. coli，是SHuffle T7 E. coli衍生菌株，属于K12亚型；补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，可提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶 DsbC基因 ，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外DsbC还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象； laclq可降低目的基因的本底表达，适合毒性基因的原核表达。SHuffle T7 E. coli pRARE菌株染色体中整合了一个拷贝的T7 RNA 聚合酶，可以表达噬菌体T7 RNA聚合酶，适合T7启动子诱导的蛋白表达；该菌株可同时表达大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 E. coli pRARE菌株具有抗T1 噬菌体的特点，具有链霉素，壮观霉素，氯霉素抗性。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在LB+cam34平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放37度培养15-20h，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。