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ER2925 感受态细胞	DL3110S	10×100ul
	DL3110M	50×100ul

基因型

F–ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22 mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10)TetS endA1 rpsL136 dam13::Tn9 xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

产品说明

ER2925菌株具有氯霉素抗性(Tn9)和硫酸链霉素(rpsL136)抗性，是甲基转移酶dam、dcm缺失的 K12 菌株，提取得到的质粒DNA可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割；甲基转移酶dam、dcm突变导致细胞内基因突变率增加，菌落生长时会产生大小两种菌落，挑菌时尽量挑中等大小或偏小的菌落。无lacIqlacZΔM15，不可进行蓝白斑筛选。endA1为突变型，去除了非特异性核酸内切酶(endA1)的活性，可获得最高质量的质粒。ER2925感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. ER2925感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作，转化高浓度质粒或连接产物可相应减少用于涂板的菌量。

2. ER2925感受态转化效率较高，对 DNA甲基化有特殊要求的试验可用ER2925代替JM110使用。

3. ER2925菌株具有氯霉素、链霉素抗性，不能用于具有氯霉素或链霉素抗性质粒的转化。

4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）