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ET12567 (pUZ8002) 感受态细胞	DL3070S	10×100ul
	DL3070M	50×100ul

基因型

F- dam-13::Tn9 dcm-6 hsdM hsdR zjj-202::Tn10 recF143 galK2 galT22 ara-14 lacY1 xyl-5 leuB6 thi-1 tonA31 rpsL136 hisG4 tsx-78 mtl-1 glnV44 (pUZ8002 Tet^R)

产品说明

ET12567 (pUZ8002)菌株来源于GM2929菌株，是甲基转移酶dam、dcm缺陷菌株，主要用于链霉菌的转基因操作。ET12567 (pUZ8002)利用接合转移的方法将链霉菌基因编辑相关质粒pSET152、pKC1139等导入链霉菌中，可以对链霉菌基因进行敲除或过表达等各种转基因操作。大部分链霉菌拥有“甲基化敏感限制系统”，是甲基化敏感受体菌，能够通过甲基修饰系统区分出自身DNA和外来DNA。普通大肠杆菌（如DH5α），其细胞中的质粒会被自身的Dam和Dem甲基化酶修饰，打上“大肠杆菌印记”，一旦链霉菌检测到带有这种“印记”的外来DNA，其限制系统就会启动，将其切割并降解，导致这类质粒转化或接合转移效率极低；所以需要转入到链霉菌中的质粒不被甲基化，ET12567(pUZ8002)菌株的两个甲基转移酶被突变，提取的质粒不会被甲基化标记，同时pUZ8002质粒含有tra基因，能够编码转移蛋白Tra，可以通过接合转移的方法将链霉菌编辑相关质粒高效导入链霉菌细胞内，完成链霉菌的转基因操作。ET12567 (pUZ8002)菌株的hsdM hsdR突变废除自身限制系统，确保不会降解外源质粒，能接受来自其他菌株的DNA；转座子Tn9插入dam基因产生dam突变的同时赋予ET12567 菌株氯霉素抗性；接合转移辅助质粒pUZ8002携带四环素抗性基因和卡那霉素抗性基因。ET12567(pUZ8002)在培养过程中需加入25 µg/ml氯霉素和25 µg/ml卡那霉素，有助于维持细胞内的dam突变和pUZ8002质粒存在。唯地生物生产的ET12567 (pUZ8002)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. ET12567 (pUZ8002)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基，37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收菌，留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB平板。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。