克隆感受态细胞
产品规格 （CAT#: DL1006）
DH5α F'Iq： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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DH5α F'Iq 感受态细胞 |
DL1006S |
10×100ul |
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| DL1006M | 50×100ul |
基因型
F´proA+B+ lacI q Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR ) / fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 φ80 Δ(lacZ) M15 gyrA96 recA1 endA1 thi-1 hsdR17
产品说明
DH5αF'Iq来源于DH5α，是DH5α衍生菌株。将lacIq突变形式通过F因子转入DH5α中，使其能够克隆毒性基因。 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5αF'Iq可用于蓝、白斑筛选；fhuA2突变使其可以抗T1噬菌体；F因子赋予DH5αF'Iq菌株能够被噬菌体M13 感染的能力。DH5αF'Iq感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。
经典热激转化操作方法
1. DH5αF'Iq感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟后待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
快速转化操作方法 (10min完成)
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH5αF'Iq感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟后待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置≥5分钟（5-90min均可）。
3. 用200ul枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
注意：DH5αF'Iq即可用热激方法转化也可以用快转方法转化，用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，涂卡那霉素或其他抗生素平板时，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或 其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)
1. DH5αF'Iq感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀，冰中静置5分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 复苏10分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。
3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. DH5αF'Iq即可用热激方法转化也可以用快转方法转化，用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，涂卡那霉素或其他抗生素平板时，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或 其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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DH5α F'Iq 感受态细胞 |
DL1006S |
10×100ul |
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| DL1006M | 50×100ul |
基因型
F´proA+B+ lacI q Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR ) / fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 φ80 Δ(lacZ) M15 gyrA96 recA1 endA1 thi-1 hsdR17
产品说明
DH5αF'Iq来源于DH5α，是DH5α衍生菌株。将lacIq突变形式通过F因子转入DH5α中，使其能够克隆毒性基因。 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5αF'Iq可用于蓝、白斑筛选；fhuA2突变使其可以抗T1噬菌体；F因子赋予DH5αF'Iq菌株能够被噬菌体M13 感染的能力。DH5αF'Iq感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。
经典热激转化操作方法
1. DH5αF'Iq感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟后待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
快速转化操作方法 (10min完成)
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH5αF'Iq感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟后待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置≥5分钟（5-90min均可）。
3. 用200ul枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
注意：DH5αF'Iq即可用热激方法转化也可以用快转方法转化，用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，涂卡那霉素或其他抗生素平板时，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或 其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)
1. DH5αF'Iq感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀，冰中静置5分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 复苏10分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。
3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. DH5αF'Iq即可用热激方法转化也可以用快转方法转化，用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，涂卡那霉素或其他抗生素平板时，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或 其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
