克隆感受态细胞
产品规格 （CAT#: DL1085）
EPI400: 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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EPI400 感受态细胞 |
DL1085S |
10×100ul |
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| DL1085M | 50×100ul |
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr
产品说明
EPI400来源于EC100菌株，将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因，即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆，在加入WDEPI-诱导剂 I后又可以提高质粒产量到正常状态。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI400感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>5×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1. EPI400感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
WDEPI-诱导剂使用方法
为了克隆毒性基因，EPI400 菌株通过改造 pcnB 基因（控制质粒拷贝数的关键基因），在未诱导条件下可显著降低质粒拷贝数，减弱基因毒性，使EPI400细胞可以稳定维持含毒性基因或不稳定 DNA 片段的质粒；在需要提取质粒时，通过在培养基中添加诱导剂，可以快速诱导质粒至高拷贝状态，实现“低拷贝稳定保存、高拷贝大量提取”的灵活调控，质粒产量可比未诱导时提高 10-100 倍。EPI300、EPI400、IPC100、IPC200这四个菌株克隆毒性基因的原理类似，使用相同的诱导剂进行诱导，与其对应的是WDEPI-诱导剂系列。
唯地生物开发了三种WDEPI-诱导剂，分别是WDEPI-诱导剂Ⅰ（货号：DL1105）、WDEPI-诱导剂Ⅱ（货号：DL1106）、WDEPI-诱导剂Ⅲ（货号：DL1107），WDEPI-诱导剂Ⅱ是WDEPI-诱导剂Ⅰ的优化版本，质粒产量比诱导剂Ⅰ的诱导效果提高1-2倍；诱导剂Ⅲ为诱导剂Ⅱ的优化版本，质粒产量比诱导剂Ⅱ的诱导效果再提高30%，使用方法略有不同，参考各诱导剂说明书使用。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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EPI400 感受态细胞 |
DL1085S |
10×100ul |
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基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr
产品说明
EPI400来源于EC100菌株，将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因，即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆，在加入WDEPI-诱导剂 I后又可以提高质粒产量到正常状态。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI400感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>5×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1. EPI400感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
WDEPI-诱导剂使用方法
为了克隆毒性基因，EPI400 菌株通过改造 pcnB 基因（控制质粒拷贝数的关键基因），在未诱导条件下可显著降低质粒拷贝数，减弱基因毒性，使EPI400细胞可以稳定维持含毒性基因或不稳定 DNA 片段的质粒；在需要提取质粒时，通过在培养基中添加诱导剂，可以快速诱导质粒至高拷贝状态，实现“低拷贝稳定保存、高拷贝大量提取”的灵活调控，质粒产量可比未诱导时提高 10-100 倍。EPI300、EPI400、IPC100、IPC200这四个菌株克隆毒性基因的原理类似，使用相同的诱导剂进行诱导，与其对应的是WDEPI-诱导剂系列。
唯地生物开发了三种WDEPI-诱导剂，分别是WDEPI-诱导剂Ⅰ（货号：DL1105）、WDEPI-诱导剂Ⅱ（货号：DL1106）、WDEPI-诱导剂Ⅲ（货号：DL1107），WDEPI-诱导剂Ⅱ是WDEPI-诱导剂Ⅰ的优化版本，质粒产量比诱导剂Ⅰ的诱导效果提高1-2倍；诱导剂Ⅲ为诱导剂Ⅱ的优化版本，质粒产量比诱导剂Ⅱ的诱导效果再提高30%，使用方法略有不同，参考各诱导剂说明书使用。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
