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费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii二代甘油菌	Brh-1011	400μl/1支

产品说明

     费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii，是由我国根瘤菌奠基人陈文新团队于 1988 年正式定名，是中华根瘤菌属（Sinorhizobium） 的代表物种，为我国本土特有快生型大豆根瘤菌。

     一.  天然分离来源：宿主来源：天然共生宿主以栽培大豆为主，侵染大豆根系形成根瘤；部分菌株可侵染豇豆、野大豆等其他豆科植物，宿主范围更广。

     二. 土壤生境：核心分布区：我国黄淮海、华北、西北盐碱 / 石灰性旱地土壤（山西、山东、河南、新疆等），是北方碱性农田中优势土著大豆根瘤菌，耐盐碱能力突出；

     三. 分离方式：从大豆田间土壤、大豆新鲜根瘤组织中分离纯化得到；商用菌株为实验室保藏驯化菌株，原始分离自国内大豆种植区土壤 / 根瘤。

     四. 生长特征：属于快生型根瘤菌，YMA 培养基 28℃培养 2–3 天即可长出单菌落，区别于慢生根瘤菌 5–7 天的生长周期。

操作方法

1. 本产品为二代甘油菌株，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YMA平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养2-5天，即可长出单菌落。

2. 交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A. -80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度地减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B. 先把接种环打开，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。

C. 客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧，可高温灭菌后二次使用。  

图1. 五段交叉划线法示意图

核心用途

（一）农业生产应用（最主要用途）

  1. 生物固氮，替代化学氮肥

  2. 商用菌剂原料

     工业发酵制成液体 / 粉剂根瘤菌拌种剂，大豆播种前拌种使用；也可与解磷菌、生防菌复配，制成复合微生物肥料。

（二）土壤生态改良

     贫瘠、退化盐碱农田修复：大豆 + 费氏中华根瘤菌轮作体系，持续补充土壤生物氮，提升土壤有机质，逐步改良盐碱化板结耕地；退耕、荒坡植被修复：搭配野大豆等本土豆科固氮先锋植物，修复退化土地。

（三）科研教学用途

  3. 高校 / 科研院所微生物实验教学：根瘤菌分离、纯化、共生盆栽验证实验标准实验菌种。

配套培养基

附言：

1. 原始配方（Atlas，2004）含有200 mg/L MgSO₄*7H₂O，我们使用100 mg/L的无水MgSO₄。

2. YMB为YMA的液体培养基形式，主要用于扩繁，不用于菌株分离和鉴定，不含碳酸钙和刚果红。

3. 刚果红母液以无菌的液体形式提供，在YMA灭菌后冷却到50度以下加入培养基。 刚果红终浓度 0.025 g/L。

注意事项

1. 客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2. 应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3. 若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。