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WB600二代甘油菌种	Bbs-1020	400ul/1支

基因型

nprE aprE epr bpf mpr nprB

产品说明

枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，细胞壁不含脂多糖（LPS），表达的蛋白无需额外去除内毒素，适合医药或食品级应用；天然具有高效的分泌系统，可将目标蛋白直接分泌到培养基中，简化纯化步骤；多数情况下无包涵体问题，表达的可溶性蛋白正确折叠，尤其适合含二硫键的蛋白（胞外环境有助于氧化折叠）；培养简单，生长快，普通LB培养基、37℃振荡即可快速生长，发酵工艺成熟。WB600菌株是常用的枯草芽孢杆菌，在BS168的基础上，敲除了6个主要的胞外蛋白酶基因：nprE aprE epr bpf mpr nprB，其胞外蛋白酶活性仅剩野生型的0.32%，因此，它能有效保护外源蛋白不被降解，维持其完整性和功能，提高蛋白产量。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在LB平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放37度培养15-24h，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

● 质粒，抗生素和培养基：

部分枯草芽孢杆菌表达质粒（pDG364、pHT43、pHT1469、pHT254【唯地货号：PB1011、PB1021、PB1031、PB1041】等）使用氯霉素进行筛选，WB600使用的筛选浓度是15ug/ml(氯霉素溶液唯地货号：YC9030L)。LB 液体培养基货号：CM1010L；LB 固体培养基货号：CM1010S。

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。