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BS168 感受态细胞	Bsc1010S	10×100μl	pHT10 (control vector, 10ng/μl)  10μl×1支
			枯草孵育培养基BsLB  300μl×1支
	Bsc1010M	50×100μl	pHT10 (control vector, 10ng/μl)  10μl×1支
			枯草孵育培养基BsLB  1.5ml×1支

基因型

trpC2 (Trp-)

产品说明

枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，细胞壁不含脂多糖（LPS），表达的蛋白无需额外去除内毒素，适合医药或食品级应用；天然具有高效的分泌系统，可将目标蛋白直接分泌到培养基中，简化纯化步骤；多数情况下无包涵体问题，表达的可溶性蛋白正确折叠，尤其适合含二硫键的蛋白（胞外环境有助于氧化折叠）；培养简单，生长快，普通LB培养基、37℃振荡即可快速生长，发酵工艺成熟。BS168模式菌株是最常用的枯草芽孢杆菌，基因组信息清晰，同源重组效率高，易于进行基因敲除、启动子替换等改造。BS168是色氨酸营养缺陷型 (trpC2)菌株，基因组已测序，是研究芽孢形成、生物膜发育等生理过程的理想材料，是大部分枯草芽孢杆菌的原始菌株，作为一个遗传背景清晰的模式菌株，BS168是理解枯草芽孢杆菌生命活动的蓝本，但它含有完整的蛋白酶系统，在表达外源蛋白时，可能会导致蛋白产量降低。 BS168化转感受态细胞经特殊工艺制作，pHT10质粒（5826bp）检测转化效率>3×10³cfu/μg DNA。

操作方法

1. BS168感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待感受态融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀。

2. EP管插入浮漂中，放37℃孵育1小时。

3. 每管加入20μl枯草孵育培养基BsLB，混匀后继续放37℃孵育1-2小时。

4. 拿出EP管，5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养至少15小时。

抗生素使用浓度

大部分枯草芽孢杆菌表达质粒（pDG364、pHT43、pHT1469、pHT254【唯地货号：PB1011、PB1021、PB1031、PB1041】等）使用氯霉素进行筛选，BS168使用的筛选浓度是5μg/ml(氯霉素溶液唯地货号：YC9030L)

LB液体培养基（货号: CM1010L）;LB 固体培养基（货号: CM1010S）。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，长时间存放会降低转化效率。

2. 加入枯草孵育培养基BsLB后，孵育2小时的转化效率相比孵育1小时可提高30%。

3. 枯草芽孢杆菌表达系统可用ITPG诱导型质粒或木糖诱导型质粒，当用IPTG诱导时，尽量使用不含乳糖的原料，若原料（蛋白胨，酵母粉等）中含有乳糖，会有严重的泄露表达（泄露表达是指不加诱导剂时目标蛋白的背景表达，大部分时候不影响试验）。

4. pHT10质粒为唯地生物优化后序列，去除一些非必须元件，添加额外的酶切位点，试验者可自行在MCS区添加各种适合枯草芽孢杆菌的蛋白表达框（组成型/诱导型），可同时添加2-3个独立的蛋白表达框同时表达2-3个蛋白。