抗霉素A - 上海唯地生物技术有限公司

分类

常用抗生素

培养基系列

抗霉素A

产品说明

抗霉素A是抗霉素A1 和A3的混合物。

功能：抑制酵母线粒体呼吸链，迫使酵母依赖发酵代谢（而非有氧呼吸）利用碳源；

原理：抗霉素 A 通过结合线粒体复合体 III，阻断电子传递链，抑制有氧呼吸产生 ATP；此时酵母需通过发酵棉子糖（经蔗糖酶水解后）生成 ATP，间接 “强化” 蔗糖酶的分泌需求，确保检测信号（如 TTC 显色）更明显；

使用注意：抗霉素 A 为有毒性的抗生素，需用甲醇溶解后过滤除菌，待培养基灭菌后冷却至 50-60℃时加入（避免高温破坏活性）。

抗霉素 A 作为 YPRAA 培养基的成分（终浓度 2 μg/mL），作用是抑制酵母线粒体呼吸链，避免胞内非分泌型转化酶的补偿作用，确保只有分泌型转化酶发挥作用使酵母利用棉子糖生长，精准验证目标信号肽的分泌功能。

产品规格和内容

包装名称	货号	包装含量	目录价	保存条件/时间
抗霉素A	BC1070L-01	200ul×1支	320	-20度/ 12个月
抗霉素A	BC1070L-02	500ul×1支	560	-20度/ 12个月

产品组分与配方

产品组分	分子式/CAS号/分子量	纯度	配方	除菌方式
抗霉素A1	C₂₈H₄₀N₂O₉ / 642-15-9 / 548.63	HPLC≥99%	1mg/ml	0.22μm过滤
抗霉素A3	C₂₆H₃₆N₂O₉ / 522-70-3 / 520.57	HPLC≥99%	1mg/ml	0.22μm过滤
甲醇溶解	------	------	------	------

培养基配制方法

YPRA(含琼脂粉，不含抗霉素A)（唯地货号：YM8013S）为固体培养基，取YPRA(含琼脂粉，不含抗霉素A)一袋，加蒸馏水450ml搅拌溶解后，定容到0.5L(不用调ph值)，121℃-15min高压灭菌，灭菌后温度降到55度以下加入20%棉子糖溶液50ml，每100mlYPRA培养基中加入1mg/ml的抗霉素 A溶液200μl，倒平板即为YPRAA(含琼脂粉，含抗霉素A)（唯地货号：YM8014S）平板。

注意事项

1. 抗霉素A固体、溶液不可高压灭菌；不可放室温长期保存，可低温保存。

抗霉素A使用方法

一，用YPRAA(含琼脂粉，含抗霉素A)培养基验证TYK12酵母系统分泌信号肽功能（pSUC2载体，唯地货号：PS1029；pSUC2-Avr1b载体，唯地货号：PS1028）：

1. 从CMD-W（唯地货号：YM8012S）或SD/-Trp（唯地货号：YM3103S）平板挑选阳性单菌落接种到CMD-W液体培养基中振荡培养过夜。

2. 取1 mL菌液，5000 rmp离心1 min，弃上清，并用灭菌ddH₂O洗涤三次，调OD600为0.5，用ddH₂O进行梯度稀释10倍、100倍、1000倍（即OD600为0.05、0.005、0.0005）。

3. 按照顺序分别取5 μl点到CMD-W或SD/-Trp平板以及YPRAA平板上，30℃培养2-3 d，观察酵母菌落形态：若试验组的信号肽有功能，可在YPRAA平板上长出正常菌落；若无功能，在YPRAA平板上不长或生长势弱。

4. CMD-W液体培养基+2μg/mL的抗霉素A摇菌，取1.5 mL菌液，12 000 rpm离心1min，弃上清，加入1.5 mL无菌ddH₂O洗涤三次。

5. 用750 μl无菌水重悬，加入250 μl TTC反应缓冲液，500 μl 10%蔗糖溶液（w/v），在37°C孵育10分钟。

6. 12 000 rpm离心1 min，取500 μl上清液，于1.5 mL离心管中，加入500 μl 1%TTC溶液，室温孵育20分钟。如果信号肽功能正常，会观察到溶液变红色，而携带pSUC2空载体的YTK12对照组不变色，或变色不明显。

关于抗霉素A（使用浓度：2μg/mL）

1. 功能：抑制酵母线粒体呼吸链，迫使酵母依赖发酵代谢（而非有氧呼吸）利用碳源；

2. 原理：抗霉素 A 通过结合线粒体复合体 III，阻断电子传递链，抑制有氧呼吸产生 ATP；此时酵母需通过发酵棉子糖（经蔗糖酶水解后）生成 ATP，间接 “强化” 蔗糖酶的分泌需求，确保检测信号（如 TTC 显色）更明显；

3. 若不加抗霉素A，酵母可通过有氧呼吸利用其他碳源（酵母粉中含有其他微量碳源）或胞内残留转化酶生长，产生假阳性，无法区分信号肽是否真的具备分泌功能。