克隆感受态细胞
产品规格（CAT#: DL1001R）
DH5α-Rec1 Competent Cell: 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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DH5α-Rec1 感受态细胞 |
DL1001RS |
20×100ul |
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| DL1001RM | 100×100ul |
基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1::RecBCO phoA
产品说明
DH5α-Rec1是DH5α的衍生菌株。将一套高效重组酶系统通过基因编辑插入DH5α的核基因中，使其在大肠杆菌体内维持高重组酶活力。 DH5α-Rec1可高效连接大片段DNA（10kb DNA片段可以一次连接成功，最高可成功连接42kb DNA片段）；可高效连接多片段DNA（5-8个 DNA片段可以一次连接成功，最高可一次性连接12个 DNA片段）。DH5α-Rec1缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；菌株原始重组酶recA1突变型保证DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α-Rec1可用于蓝、白斑筛选；DH5α-Rec1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。
经典热激转化操作方法
1. DH5α-Rec1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟后待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA（重组产物或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60-90分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取50-100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
6. DNA的重组和连接可用其他公司的重组酶、连接酶，也可用本公司的重组试剂盒或连接试剂盒。
GibsonAssembly重组试剂盒操作方法
1. 使用Gibson重组试剂盒（唯地货号：VC1001）：加入线性化载体100 ng，片段200-800 ng，5μl 重组酶Mix，混匀后静置于50度水浴15-60min(片段越大，时间越长)，从50度水浴拿出，插入冰中静置30S。
2. 按热激转化操作方法转入DH5α-Rec1感受态，涂相应抗生素平板，将平板放37℃培养15 -20h。
T4 ligase连接试剂盒操作方法
1. 使用T4 ligase连接试剂盒（唯地货号：VC2001）：加入线性化载体100 ng，片段200-800 ng，5μl T4 ligase Mix，混匀后静置与25度水浴60min，75℃ for 20min，50℃ for 30 min，插入冰中静置 30S以上。
2. 按热激转化操作方法转入DH5α-Rec1感受态，涂相应抗生素平板，将平板放37℃培养15 -20h。
核心优势
1. 永久整合型重组酶系统，重组酶基因稳定整合于大肠杆菌基因组，持续表达高活力重组酶，无游离质粒，方便进行质粒构建。
2. 重组效率提升10-20倍：特别适合长片段（5-42kb）基因操作；特别适合多片段重组（最多12个片段）。
3. T4连接酶连接效率提升10-20倍：特别适合长片段（5-42kb）基因操作。
4. 质粒稳定性比普通大肠杆菌提高2倍：质粒骨架稳定，错误重组率低。
图1. DH5α-Rec1感受态与其他克隆感受态构建载体阳性菌落数对比（12kb plasmid+2.5kb/4.5kb/8kb/10kb片段）。
图 2. 质粒连接大片段DNA转化DH5α-Rec1感受态构建载体的试验结果：图中分别连接 34kb 和 42kb 基因簇。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。转化高效率的连接产物可减少最终用于涂板的菌量。
2. 若要获得大量，高纯度质粒，可使用通用质粒诱导剂Ⅱ/Ⅲ（货号CAT#：DL1206/DL1207）。
3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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DH5α-Rec1 感受态细胞 |
DL1001RS |
20×100ul |
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基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1::RecBCO phoA
产品说明
DH5α-Rec1是DH5α的衍生菌株。将一套高效重组酶系统通过基因编辑插入DH5α的核基因中，使其在大肠杆菌体内维持高重组酶活力。 DH5α-Rec1可高效连接大片段DNA（10kb DNA片段可以一次连接成功，最高可成功连接42kb DNA片段）；可高效连接多片段DNA（5-8个 DNA片段可以一次连接成功，最高可一次性连接12个 DNA片段）。DH5α-Rec1缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；菌株原始重组酶recA1突变型保证DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α-Rec1可用于蓝、白斑筛选；DH5α-Rec1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。
经典热激转化操作方法
1. DH5α-Rec1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，3-5分钟后待菌块融化(融化一半即可使用)，加入目的DNA（重组产物或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60-90分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取50-100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
6. DNA的重组和连接可用其他公司的重组酶、连接酶，也可用本公司的重组试剂盒或连接试剂盒。
GibsonAssembly重组试剂盒操作方法
1. 使用Gibson重组试剂盒（唯地货号：VC1001）：加入线性化载体100 ng，片段200-800 ng，5μl 重组酶Mix，混匀后静置于50度水浴15-60min(片段越大，时间越长)，从50度水浴拿出，插入冰中静置30S。
2. 按热激转化操作方法转入DH5α-Rec1感受态，涂相应抗生素平板，将平板放37℃培养15 -20h。
T4 ligase连接试剂盒操作方法
1. 使用T4 ligase连接试剂盒（唯地货号：VC2001）：加入线性化载体100 ng，片段200-800 ng，5μl T4 ligase Mix，混匀后静置与25度水浴60min，75℃ for 20min，50℃ for 30 min，插入冰中静置 30S以上。
2. 按热激转化操作方法转入DH5α-Rec1感受态，涂相应抗生素平板，将平板放37℃培养15 -20h。
核心优势
1. 永久整合型重组酶系统，重组酶基因稳定整合于大肠杆菌基因组，持续表达高活力重组酶，无游离质粒，方便进行质粒构建。
2. 重组效率提升10-20倍：特别适合长片段（5-42kb）基因操作；特别适合多片段重组（最多12个片段）。
3. T4连接酶连接效率提升10-20倍：特别适合长片段（5-42kb）基因操作。
4. 质粒稳定性比普通大肠杆菌提高2倍：质粒骨架稳定，错误重组率低。
图1. DH5α-Rec1感受态与其他克隆感受态构建载体阳性菌落数对比（12kb plasmid+2.5kb/4.5kb/8kb/10kb片段）。
图 2. 质粒连接大片段DNA转化DH5α-Rec1感受态构建载体的试验结果：图中分别连接 34kb 和 42kb 基因簇。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。转化高效率的连接产物可减少最终用于涂板的菌量。
2. 若要获得大量，高纯度质粒，可使用通用质粒诱导剂Ⅱ/Ⅲ（货号CAT#：DL1206/DL1207）。
3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
