产品规格

产品内容

操作方法

一，感受态制作方法

每4ml农杆菌菌液制作1支感受态，对应0.2ml W1 Buffer，0.1ml ST Buffer。

制作感受态前将W1 Buffer，ST Buffer埋入冰中预冷至少15分钟，离心机提前调到4℃预冷；准备好液氮。

1.农杆菌菌种在YEB/TY平板上划线，挑新鲜的单菌落接种到3ml YEB/TY（用50ml离心管）中30度，250rpm摇菌24h左右， 直到菌液变浓(OD600值>2.0)，取2ml菌液接种到200ml YEB/TY（用1000ml三角瓶）中，250rpm摇菌到OD600约0.6-0.8，菌液放冰水中冰浴10-15分钟。

2.4℃、3000g、5min离心收集菌体，弃上清，加入10 ml 预冷的W1 Buffer，吸打，重悬农杆菌细胞，冰浴10分钟。

3.4℃、3000g、5min离心收集菌体，弃上清，加入5 ml 预冷的ST Buffer，吸打，重悬农杆菌细胞，冰浴10分钟，按每支感受态0.1ml分装，立即丢入液氮中速冻，液氮中放置1-10分钟后取出放-80度冰箱，可长期保存。

二，感受态转化方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2. 每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB/TY液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天

注意事项

1. 制作不同数量的感受态，按比例使用各种试剂。

2.不开封的试剂盒各组分可保存两年，开封后若发现染菌，停止使用。