产品规格

产品组分与配方

PH值( 25°C)：7.0±0.2，本产品加入PH7.0的去离子水后PH接近7.0，可不调ph值直接使用。

产品说明

  AIM-LP Broth：唯地生物开发，适合大于80kd蛋白原核表达的大肠杆菌自诱导培养基。在其中补充含有更多小肽，的蛋白胨、酵母粉、非蛋白分子伴侣、氨基酸混合物、硫胺素、葡萄糖、乳糖、镁离子、钠离子、钾离子配制成AIM-LP Broth，主要用于大肠杆菌中由T7启动子诱导蛋白表达的试验（或IPTG诱导蛋白表达的试验）。与传统的LB-IPTG蛋白诱导方法不同，自诱导培养基允许T7启动子系统的自动调节，诱导表达，无需检测培养基中菌体OD值，无需添加IPTG，并且蛋白表达量比IPTG诱导的蛋白量更高。

  自诱导培养基作用机制：在葡萄糖存在时，大肠杆菌优先利用葡萄糖，葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖，促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽（通常发生在对数中后期），乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂，促进乳糖阻遏物从启动子的DNA结合位点上释放，启动重组蛋白的表达。对于含有DE3元件的大肠杆菌，异乳糖使T7lac启动子去阻遏，诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式，在原核表达菌生长到某一特定点时蛋白表达自发开始，无需监测细胞密度（OD600）和添加IPTG。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比，使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。

AIM-LP Broth自诱导培养基具有以下优点：

1. 不需添加任何IPTG或相关诱导物，节约成本，消除了IPTG毒性。

2. 不需要监控菌液密度，省时省力，尤其适合大规模筛选。

3. 细菌生长密度高于IPTG诱导表达系统，通常是IPTG诱导系统的1.5-2倍。

4. 蛋白表达量高于IPTG诱导表达系统，一般为IPTG诱导系统的1.5-3倍。

5. 诱导前本底表达极低或无表达，特别适合毒性基因的表达。

6. 防止质粒丢失：毒性蛋白的本底表达会导致质粒不稳定，增加质粒丢失概率，自诱导可减轻毒性，防止质粒丢失。

7. 渐进诱导：自诱导培养基的诱导表达是随着细胞消耗葡萄糖并切换到乳糖而逐渐发生的，不是突然一次全部开启（如IPTG）。这种渐进的诱导方式对细胞的压力较小，可提高大肠杆菌存活率。

8. 本产品即开即用，操作简单，与各种细胞培养容器兼容(如培养瓶、深孔管、发酵罐等)。

注意：哪种自诱导培养基更适合目标蛋白的表达需要做预试验确认，不同蛋白需要不同的自诱导培养基进行诱导表达，很难在诱导之前预测结果。

使用方法

  取AIM-LP Broth 粉剂培养基一袋，加双蒸水450ml溶解后，定容到495 ml，121℃-20min高压灭菌，灭菌后待温度降到60度以下，加入0.5ml AIM葡萄糖溶液，5ml AIM乳糖溶液，混匀后即可使用或室温保存。

注意：非蛋白分子伴侣Ⅱ可加可不加，不同蛋白有不同的最适浓度，实验者可根据目标蛋白不同设置不同的浓度梯度，非蛋白分子伴侣Ⅱ的梯度一般为：0、1%、2%。

蛋白自诱导方法：

1. 准备含有目的质粒的原核表达大肠杆菌单菌落（可质粒转化感受态涂板，也可平板划线）。

2. 小摇接菌：将单菌落接种到含有1-3ml 含相应抗生素的液体LB/2YT的透气试管中。

3. 37℃，200 rpm过夜摇菌约10-24h，菌体摇浓，一般要求OD600>2.0。

4. 按2-5%的比例接菌到AIM-LP Broth自诱导培养基中，

  A. 30-37度诱导：200-300rpm，摇菌8-24h。

  B. 15-25度诱导：200-300rpm，摇菌12-48h。

  C. 若所表达蛋白为毒性蛋白或菌体生长过慢，可先在37度摇菌，待菌体OD600=0.8左右时降低到目标温度。

5. 最佳摇菌时间与所表达蛋白有关，为找到最佳诱导时间可在不同诱导时间点取样检测蛋白表达量。

注意事项

1. AIM-LP Broth自诱导培养基需先补水，121℃-20min高压灭菌后使用；若发现有严重吸潮现象，停止使用。

2. 少部分蛋白用自诱导培养基的方法诱导蛋白可能不如常规IPTG诱导表达系统，遇到此类蛋白可使用常规的IPTG诱导方法。

3. 若配制少于0.5L，按配方比例加入即可，剩余培养基封口后放干燥处保存。

4. 大肠杆菌表达菌株必须含有lac操纵子（包括lacY和lacZ），如BL21（DE3）、Rosetta（DE3）、TB1、Mg1655等；而T7 Express lysY等菌株不含完整的lac操纵子，不能使用自诱导培养基。