产品规格

产品组分与配方

PH值( 25°C)：6.1±0.2，本产品加入PH7.0的去离子水后PH接近6.1，可不调ph值直接使用。

产品说明

     AIM-Ac Broth：唯地生物开发的的酸性自诱导培养基（PH6.1），适合等电点为中性或等电点大于7.0的蛋白表达。在其中补充含有更多小肽的蛋白胨、酵母粉、非蛋白分子伴侣、氨基酸混合物、硫胺素、腺嘌呤、葡萄糖、乳糖、镁离子、钠离子、钾离子，配制成AIM-Ac Broth，主要用于大肠杆菌中由T7启动子诱导蛋白表达的试验（或IPTG诱导蛋白表达的试验）。与传统的LB-IPTG蛋白诱导方法不同，自诱导培养基允许T7启动子系统的自动调节，诱导表达，无需检测培养基中菌体OD值，无需添加IPTG，并且蛋白表达量比IPTG诱导的蛋白量更高。

     自诱导培养基作用机制：在葡萄糖存在时，大肠杆菌优先利用葡萄糖，葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖，促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽（通常发生在对数中后期），乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂，促进乳糖阻遏物从启动子的DNA结合位点上释放，启动重组蛋白的表达。对于含有DE3元件的大肠杆菌，异乳糖使T7lac启动子去阻遏，诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式，在原核表达菌生长到某一特定点时蛋白表达自发开始，无需监测细胞密度（OD600）和添加IPTG。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比，使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。

注意：哪种自诱导培养基更适合目标蛋白的表达需要做预试验确认，不同蛋白需要不同的自诱导培养基进行诱导表达，很难在诱导之前预测结果。

AIM-Ac Broth自诱导培养基的工作原理

1. 蛋白质的等电点（pI） 是其在溶液中净电荷为零时的pH值。当环境pH值低于pI时，蛋白质带正电；高于pI时，带负电。等电点影响蛋白质溶解度和稳定性：当培养基的pH值远离目标蛋白的pI时，蛋白质分子表面带有大量同种电荷，电荷之间的相互排斥力有助于阻止蛋白质分子聚集沉淀，提高其溶解度和稳定性；反之，如果培养基pH值接近目标蛋白的pI，蛋白质分子易于聚集，形成沉淀（包涵体）。

2. 虽然大肠杆菌能调节其细胞质pH，但外部培养基的pH变化会影响细胞的代谢状态、胁迫响应以及周质等亚细胞区室的微环境。对于分泌到周质或培养基中的蛋白质，外部pH直接影响其折叠环境，调整培养基pH效果相对更直接、有效；对于胞内可溶性表达的蛋白，外部的pH调整通过间接方式影响胞内环境，效果有限但值得尝试；对于极易形成包涵体的蛋白，调整pH可作为综合优化策略的一部分。单独使用这种酸性或碱性自诱导培养基可能无法完全解决问题，但结合其他方法（如低温诱导、融合标签、共表达分子伴侣等）可显著提高可溶蛋白比例。

使用方法

     取AIM-Ac Broth 粉剂培养基一袋，加双蒸水450ml溶解后，定容到495 ml，121℃-20min高压灭菌，灭菌后待温度降到60度以下，加入0.5ml AIM葡萄糖溶液，5ml AIM乳糖溶液，混匀后即可使用或室温保存。

注意：非蛋白分子伴侣Ⅱ可加可不加，不同蛋白有不同的最适浓度，实验者可根据目标蛋白不同设置不同的浓度梯度，非蛋白分子伴侣Ⅱ的梯度一般为：0、1%、2%。

蛋白自诱导方法：

1. 准备含有目的质粒的原核表达大肠杆菌单菌落（可质粒转化感受态涂板，也可平板划线）。

2. 小摇接菌：将单菌落接种到含有1-3ml 含相应抗生素的液体LB/2YT的透气试管中。

3. 37℃，200 rpm过夜摇菌约10-24h，菌体摇浓，一般要求OD600>2.0。

4. 按2-5%的比例接菌到AIM-Ac Broth自诱导培养基中，

   A. 30-37度诱导：200-300rpm，摇菌5-24h。

   B. 15-25度诱导：200-300rpm，摇菌24-36h。

   C. 若所表达蛋白为毒性蛋白或菌体生长过慢，可先在37度摇菌，待菌体OD600=0.8左右时降低到目标温度。

5. 最佳摇菌时间与所表达蛋白有关，为找到最佳诱导时间可在不同诱导时间点取样检测蛋白表达量。

注意事项

1. AIM-Ac Broth自诱导培养基需先补水，121℃-20min高压灭菌后使用；若发现有严重吸潮现象，停止使用。

2. 少部分蛋白用自诱导培养基的方法诱导蛋白可能不如常规IPTG诱导表达系统，遇到此类蛋白可使用常规的IPTG诱导方法。

3. 若配制少于0.5L，按配方比例加入即可，剩余培养基封口后放干燥处保存。

4. 大肠杆菌表达菌株必须含有lac操纵子（包括lacY和lacZ），如BL21（DE3）、Rosetta（DE3）、TB1、Mg1655等；而T7 Express lysY等菌株不含完整的lac操纵子，不能使用自诱导培养基。