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产品内容

操作方法

一，感受态制作方法

1. 制作感受态前需要准备LB液体培养基，LB平板，液氮，-80度超低温冰箱；提前将W1、ST Buffer插入冰中预冷。

2. 大肠杆菌菌种在LB平板上划线，挑新鲜的单菌落到3-6ml LB（用50ml离心管）中37度，200rpm摇菌12-24h， OD600>2.0即可。

3. 将三角瓶中LB液体培养基放19度摇床，调19度预冷30min，按2%的比例接菌到 LB中，19度，200rpm摇菌到OD600=0.5-0.8；按照5ml 菌液制作一支感受态准备LB液体培养基。

4. 离心机提前调到4度预冷，1700-1800g、5min离心收集菌体，吸干残液，加入摇菌用LB 1/25 体积的W1 Solution，用5ml枪头吹打大肠杆菌沉淀，直到大肠杆菌细胞完全分散开，溶液中无菌块，冰水中静置8min。

5. 4度、1700-1800g、5min离心收集菌体，吸干残液，插入冰中，加入适量体积冰中预冷的ST Solution（按摇菌用LB 1/50 体积准备ST Solution），用5ml枪头吹打大肠杆菌沉淀，直到大肠杆菌细胞完全分散开，溶液中无菌块，冰水中静置8min。按100μl/支分装感受态，分装好的感受态立即放入液氮中，液氮中1-10min后转入-80度超低温冰箱，可长期保存（如无温度波动，可保存2-5年）。

二，感受态转化方法

1. 大肠杆菌感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

包装说明

注意事项

1. 制作不同数量的感受态，按比例使用各种试剂，puc19质粒浓度过低，室温时容易降解，使用时插入冰中，放手心中缓慢解冻，1/3体积融化即可使用，不可长时间放室温解冻。

2. 此种方法制作的感受态可在-80度长期保存。

3. 不开封的试剂盒各组分可保存两年，开封后若发现染菌，停止使用。