今天是2019年11月14日 星期四,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: weidibio.com

新品推荐

EGY48

文字:[大][中][小] 2015-8-27    浏览次数:2171    

EGY48  Chemically Competent Cell 产品说明书




产品规格 (CAT#: YC1030)

EGY48 Competent Cell:                                       100μl/支              保存: -80℃(3个月)

pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)                           10μl              保存:-80℃(12个月)

Carrier DNA (5 μg/μl)                                              100μl              保存:-20℃(12个月)

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12个月)



基因型

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2


产品说明

EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA系统酵母双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;Transformation marker为:his3trp1ura3,报告基因为:LEU2;报告基因UAS (上游激活序列)来源于LexA op(x6),只有当 Bait和 Prey互作时才能启动 LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3,用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白 (Bait)的融合蛋白;质粒pB42AD的筛选标志为TRP1,用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白;报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3,报告基因为LacZ,报告基因UAS来源于LexA op(x6),只有当 Bait和 Prey互作时才能启动 LacZ表达。EGY48感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGBKT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。


操作方法
1. 取100 μl冰上融化的EGY48感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5ug,Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/LiAc  500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
2. 将管放42度水浴15min  (7.5 min时翻转6-8次混匀)。   
3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清,ddH2O 400ul 重悬,离心 30s 弃上清。                       

4. ddH2O 50ul重悬,涂板,29℃培养48-96h。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. EGY48酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90 h培养可见直径1 mm克隆。


说明书下载

EGY48 Chemically Competent Cell 产品说明书


返回上一步
打印此页
[向上]
在线客服

销售QQ

技术QQ

咨询电话:
021-34790199

请扫描二维码
打开手机站