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克隆感受态_热激

BJ5183-AD-1

文字:[大][中][小] 2016-3-31    浏览次数:2554    

                    BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell 产品说明书




产品规格(CAT#: DL1076)

BJ5183-AD-1:                                                   100μl/支

pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl):                10μl

保存条件(保质期):                                     -80℃(6个月) 


基因型

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)] 



产品说明

BJ5183-AD-1是携带了腺病毒质粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)],赋予该菌株氨苄抗性,在病毒质粒构建时,只需转入线性化的目的质粒即可,简化了实验步骤,提高了病毒质粒重组概率。StrR 赋予BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。BJ5183-AD-1感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(size:1163bp)检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA。


操作方法

1. BJ5183-AD-1感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒(含有目标基因并线性化),并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后,可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁,纯化质粒。

4. BJ5183-AD-1感受态细胞对温度敏感,应储存在-80℃超低温冰箱,避免温度波动,温度波动会降低感受态转化效率。




说明书下载

BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell 产品说明书



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