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克隆感受态_热激

Stbl2

文字:[大][中][小] 2015-8-26    浏览次数:3899    

Stbl2 Chemically Competent Cell 产品说明书




产品规格(CAT#: DL1045)

Stbl2:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 



基因型

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 


产品说明

Stbl2菌株来源于 JM109 E. coli strain,适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列,逆转录病毒序列等); mcrA突变和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列;同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19检测转化效率可达109 cfu/μg DNA。


操作方法

1. Stbl2感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。

4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。

(当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃225 rpm复苏60分钟

5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.或LB培养基上。

6. 将平板倒置放于37℃或30℃培养箱过夜培养。

(当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃培养过夜)


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. S.O.C.或LB培养基均可使用,S.O.C.可提高转化效率20%;实验人员可选择在37℃或30℃培养细胞,37℃条件下,菌生长速度加快,有利于提高质粒产量,30℃培养可降低错误重组概率。





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